[發明專利]一種高表達SND1-FLAG轉基因小鼠模型的制備方法

無效

• 申請號: 201310285219.6
• 申請日: 2013-07-09
• 公開（公告）號: CN104278056A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 楊潔;高星杰;魏民新;王鑫廷;段中潮;辛靈彪
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.一種高表達SND1-FLAG轉基因小鼠模型的制備方法，其特征包括以下步驟：

第1步、pInsulator-CAG-3×FLAG-SND1轉基因載體構建；

第2步、轉基因載體原核顯微注射；

第3步、品系基因鑒定，最終建立小鼠基因組中帶有外源SND1基因的遺傳性小鼠突變模型。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于第1步所述pInsulator-CAG-?3×FLAG-SND1轉基因載體的構建方法是，以EcoRⅠ為分界點將較長的小鼠SND1基因ORF分為SND1-A和SND1-B兩個片段，先后插入轉基因載體中；轉基因載體中SND1基因N端追加有一個3×FLAG標簽基因。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于第2步所述的轉基因載體原核顯微注射是：將外源線性pInsulator?CAG?3×FLAG?SND1轉基因載體注射到C57BL6/j小鼠受精卵細胞核內；外源的SND1基因會隨機插入到小鼠基因組中，最終構建的SND1轉基因小鼠能夠在全組織中過表達攜帶有3×FLAG標簽的SND1蛋白，便于進行后續的蛋白沉淀、蛋白印跡、質譜分析實驗。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于第3步所述的基因鑒定是：出生的首代SND1轉基因陽性的小鼠即為Founder小鼠；每個Founder都將被視為一個獨立的品系進行繁育，對每個founder品系都進行首次剪趾，二次剪尾的PCR鑒定。