[發(fā)明專利]一種丙氧酚人工抗原的制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310283134.4 | 申請(qǐng)日： | 2013-07-05 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103360487A | 公開（公告）日： | 2013-10-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 邵越水;徐建 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 杭州博林生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K14/765 | 分類號(hào)： | C07K14/765 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市杭*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 丙氧酚 人工 抗原 制備 方法 | ||
1.一種丙氧酚人工抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)?制備人工半抗原：
(a)?將(2S,3R)-(+)-4-二甲氨基-1,2-二苯基-3-甲基-2-丁醇和戊二酸酐以摩爾比為1：10加入圓底燒瓶中，100℃下攪拌反應(yīng)72小時(shí)后，減壓蒸干溶劑，殘?jiān)脷溲踱c水溶液逐步溶解，再用飽和氫氧化鈉水溶液調(diào)pH=9，經(jīng)乙酸乙酯洗滌后水相用鹽酸溶液調(diào)pH=1，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，經(jīng)干燥，過濾，減壓蒸餾得到棕褐色固體，薄層層析法純化得到丙氧酚半抗原；薄層層析：層析液體積比：95%乙醇︰1,4-二氧六環(huán)︰二氯甲烷︰氨水=8︰1︰10︰1；產(chǎn)物Rf?=0.3；
????(2)?制備丙氧酚人工抗原：
(b）?將丙氧酚半抗原與N-羥基琥珀酰亞胺、環(huán)己基碳酰二亞胺以摩爾比為1︰1.5︰1.5溶于N,N-二甲基甲酰胺中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)18小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后離心取上清液記為A液；
(c)?將氯化鈉與十二水磷酸氫二鈉、二水磷酸二氫鈉以摩爾比為78.3︰4.2︰1溶于雙蒸水中，制備鈉離子濃度為0.1mol/L的PBS緩沖液，pH為7.4；
(d)?將牛血清蛋白溶于PBS緩沖液中，得到濃度為10mg/ml的B液；
(e)?將A液緩慢滴加到B液，A液與B液的體積比為1︰10，得到的混合液在4℃條件下靜置保存過夜，得到人工抗原混合液；
(f)?將人工抗原混合液于PBS緩沖液中透析，透析結(jié)束后離心取上清液即得到人工抗原：丙氧酚-牛血清蛋白。
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