[發明專利]鐵皮石斛的莖尖組培繁殖方法

無效

• 申請號: 201310282962.6
• 申請日: 2013-07-08
• 公開（公告）號: CN103314859A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 楊再江;劉湘鳳;顧君;龔成珍;祝利
• 申請（專利權）人: 重慶市秀山紅星中藥材開發有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于中藥材種植技術領域，特別是一種鐵皮石斛的莖尖組培繁殖方法。

背景技術

石斛為我國傳統名貴中藥材，我國歷版藥典均有記載。中藥石斛的原植物為蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Dendrobium?Sw.）多年生草本植物。石斛屬為蘭科比較大的屬之一，全球約有1000余種，我國石斛屬植物共有74種2變種，其中商品流通的占50余種。其中以鐵皮石斛最為珍貴，為所有石斛之極品。鐵皮石斛為瀕危物種，屬國家二級重點保護植物，是名貴珍稀中藥材。古代貴族稱鐵皮石斛為“紫楹仙姝”、“千年潤”，民間又稱“救命仙草”。正宗鐵皮石斛呈鐵綠色，氣微，嚼之有黏性，味甘，少渣，長期食用無任何副作用。用鐵皮石斛邊炒邊扭成螺旋狀并烘干后稱鐵皮楓斗。

多年以來，商品石斛主要依靠野生藥用石斛資源，隨著藥用石斛開發利用的不斷深入和國內外需求量的逐年增加，我國野生藥用石斛資源遭到了嚴重破壞，有些地區甚至面臨枯竭。為了保護野生蘭科植物資源，各國都出臺了許多禁止采挖或銷售野生蘭科植物的法規和條例，1987年國務院出臺的《野生藥材資源保護管理條例》中，環草石斛、黃草石斛、金釵石斛、馬鞭石斛和鐵皮石斛被列為國家三級珍稀瀕危保護植物。由此人們逐漸開始對鐵皮石斛的野生植物進行家種栽培、高產栽培技術等加以實踐。目前鐵皮石斛的繁殖技術主要為種子繁殖、分株繁殖和扦插繁殖兩種方式。

由于鐵皮石斛種子難收集，種子發芽率低，而且種子繁殖，育苗時間長，大大增加了鐵皮石斛的栽培成本，不利于鐵皮石斛的人工大面積種植。所以在當前的人工栽培中，繁殖主要依靠分株繁殖和扦插繁殖，但該方法繁殖系數低，既不經濟，又限制了鐵皮石斛的產量潛力，不便栽植管理推廣，因而擴大種植面積受到抑制。人們開始了人工繁殖，許多地方采用了組培繁殖方法以快速獲得大量幼苗；目前繁殖速度很慢，無法滿足實際需要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鐵皮石斛的莖尖組培繁殖方法，以提高鐵皮石斛的繁殖速度，實現鐵皮石斛栽培的規范化和規模化發展；為實現這一目的，發明人經過長期試驗，成功研究了繁殖鐵皮石斛的各種組織培養基質配方和培養方法，對組織培養基質配方和生產工藝，以及鐵皮石斛的特殊生長習性進行了大量研究和反復試驗，獲得了獨創的培養基配方和培養方法。

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是鐵皮石斛的莖尖組培繁殖方法，包括引種滅菌、誘導培養、增殖培養、分化培養、壯苗和生根培養五大步驟，其特征在于具體方法如下。

⑴引種滅菌：選取健壯的野生鐵皮石斛苗，從莖尖上切下長2.5～3.5cm的幼嫩莖尖，在流水下沖洗，放入1%洗潔精水溶液中浸泡5?分鐘，然后用刷子輕輕刷洗，并用無菌水充分洗凈；在超凈工作臺上將莖尖放置在75％的酒精中消毒30s后，再用0．1％的HgCl₂水溶液浸泡7～9min，然后用無菌水沖洗5～6次。

⑵誘導培養：將消毒處理后的幼嫩莖尖作為外植體接種在誘導培養基上，每瓶接種3～5株莖尖，在夜溫22℃，日溫24℃，相對濕度68%～70%，光照強度3000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長12小時的條件下進行圓球莖誘導培養，15～20天后，外植體開始萌動，莖尖膨大，切面及頂部組織形成疏松組織；繼續培養15天后，轉入到促形培養基中，每瓶培養2～4株莖尖，在夜溫23℃，日溫25℃，相對濕度70%～72%，光照強度3000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長14小時的條件下進行圓球莖促形培養，25～30天后，切面及頂部膨大組織的表面逐漸形成凹凸不平的顆粒物，隨著培養時間的延長，顆粒物長大形成直徑1～2mm的圓球莖顆粒物。

⑶增殖培養：將誘導產生的生長狀態良好的圓球莖轉入到增殖培養基中，每瓶接種2～3顆，在夜溫24℃，日溫26℃，相對濕度70%～72%，光照強度2000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長14小時的條件下進行圓球莖增殖培養，在15～20天之內可觀察到增殖培養基中又有新的疏松組織產生，在35～40天之內，可觀察到圓球莖增殖了2～3倍。