[發明專利]鐵皮石斛的莖尖組培繁殖方法

無效

• 申請號: 201310282962.6
• 申請日: 2013-07-08
• 公開（公告）號: CN103314859A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 楊再江;劉湘鳳;顧君;龔成珍;祝利
• 申請（專利權）人: 重慶市秀山紅星中藥材開發有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.鐵皮石斛的莖尖組培繁殖方法，包括引種滅菌、誘導培養、增殖培養、分化培養、壯苗和生根培養五大步驟，其特征在于具體方法如下；

⑴引種滅菌：選取健壯的野生鐵皮石斛苗，從莖尖上切下長2.5～3.5cm的幼嫩莖尖，在流水下沖洗，放入1%洗潔精水溶液中浸泡5?分鐘，然后用刷子輕輕刷洗，并用無菌水充分洗凈；在超凈工作臺上將莖尖放置在75％的酒精中消毒30s后，再用0．1％的HgCl₂水溶液浸泡7～9min，然后用無菌水沖洗5～6次；

⑵誘導培養：將消毒處理后的幼嫩莖尖作為外植體接種在誘導培養基上，每瓶接種3～5株莖尖，在夜溫22℃，日溫24℃，相對濕度68%～70%，光照強度3000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長12小時的條件下進行圓球莖誘導培養，15～20天后，外植體開始萌動，莖尖膨大，切面及頂部組織形成疏松組織；繼續培養15天后，轉入到促形培養基中，每瓶培養2～4株莖尖，在夜溫23℃，日溫25℃，相對濕度70%～72%，光照強度3000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長14小時的條件下進行圓球莖促形培養，25～30天后，切面及頂部膨大組織的表面逐漸形成凹凸不平的顆粒物，隨著培養時間的延長，顆粒物長大形成直徑1～2mm的圓球莖顆粒物；

⑶增殖培養：將誘導產生的生長狀態良好的圓球莖轉入到增殖培養基中，每瓶接種2～3顆，在夜溫24℃，日溫26℃，相對濕度70%～72%，光照強度2000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長14小時的條件下進行圓球莖增殖培養，在15～20天之內可觀察到增殖培養基中又有新的疏松組織產生，在35～40天之內，可觀察到圓球莖增殖了2～3倍；

⑷分化培養：將增殖產生的生長狀態良好的圓球莖轉接到分化培養基上，每瓶接種2～3顆，在夜溫25℃，日溫27℃，相對濕度72%～75%，光照強度3000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長12小時的條件下進行分化培養，在20～25天之內可觀察到圓球莖開始分化出芽點，然后將溫度調整為夜溫26℃，日溫28℃，在第35～40天之內，可觀察到圓球莖長出小芽并開始分葉，到第50天可看到增殖芽長高1-1.5cm并帶有2～3片小葉，得到分化苗；

⑸壯苗及生根培養：將分化培養后的株高1～2cm、帶有2～3片葉的小芽切下轉入生根培養基上，每瓶接種3～5株，在夜溫26℃，日溫28℃，相對濕度72%～75%，光照強度2000lx，每天光照開始時間上午7:00，每天光照時長12小時的條件下進行生根培養，在第20～25天之內，基部開始出現2～3條約1cm長的白色根，每株苗有3～5條根，隨后逐漸伸長，到在第35～40天之內，生根率達到90％以上，根須長度1.5cm～2.0cm，苗高3～5cm，即得到鐵皮石斛的生根苗，這時可進行煉苗，移栽；

上述組培繁殖方法中，所提到的各階段培養基的配方是：

誘導培養基：MS+6-BA0.5mg／L+NAA0.05mg／L+20?g/L香蕉+30?g/L?+活性炭0.2g／L；pH5.8；

促形培養基：MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L+20?g/L香蕉+30?g/L?+活性炭0.2g／L；pH5.8；

增殖培養基：DM+土豆40g/L+瓊脂5g/L；pH5.8；

分化培養基：DM+BA0.2-0.8香蕉25g/L+瓊脂5g/L+糖20?g/L；pH5.8；

生根培養基：DM+BA0.5PPM+香蕉35g/L+瓊脂5g/L+糖20?g/L；pH5.6。