[發明專利]人工血小板PLGA-PEG-RGD在制備靜脈用全身性納米止血藥中的應用

有效

• 申請號: 201310282835.6
• 申請日: 2013-07-05
• 公開（公告）號: CN103386114A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 檀英霞;萬一千;宮鋒;季守平;李素波;王磊磊;高紅偉;宋錦文;張士坤;王穎麗;鮑國強
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所
• 主分類號: A61K38/06
• 分類號: A61K38/06;A61K9/16;A61K47/48;A61P7/04;A61F17/00
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

技術領域

本發明涉及一種兩親性的高分子材料負載多肽的人工血小板，具體涉及一種新型的PLGA-PEG納米顆粒負載RGD三肽的人工血小板PLGA-PEG-RGD及其制備方法與以其為活性成分制備靜脈用全身性納米止血藥中的應用。

背景技術

創傷大失血導致的死亡率無論在平時和戰時都很高。失血可分為內出血和外出血，平時的創傷患者擁有“黃金一小時”的救治時間，而對于戰場上的傷員只有“白金5分鐘”。傳統的傷口止血材料(急救包、四頭帶、止血帶和繃帶等)基本解決了嚴重的外出血的止血問題，而內出血大部分是因臟器破裂造成，因無法使用外用止血材料，使傷后“第一時間”止血幾乎不可能，失血性休克的發生率及傷員的死亡率高。因此，如何在第一時間快速有效地救治大失血及內出血病人是戰傷救治的重要問題。

重組人凝血因子VII(rFVII)是全身用止血藥的代表，但rFVII具有分子量大、生產成本高、價格昂貴、表達量低、易失活、不易保存等缺點，大大限制了其在戰傷救治中的應用(Nunez?TC，Cotton?BA.Transfusion?therapy?in?hemorrhagic?shock.Curr?Opin?Crit?Care2009，15：536-541)。另外，血小板制品因供者來源有限、免疫原性、不易儲存、易失活等缺缺陷，也限制了其在緊急救治中的應用。

近年來，研究者用高分子材料負載多肽構建人工血小板的研究成為了納米止血材料的一個新的方向。Lavik小組報道了一種高分子材料負載止血活性因子的合成血小板(Bertram?JP，Williams?CA，Robinson?R，et?al.Intravenous?Hemostat：Nanotechnology?to?Halt?Bleeding.Sci?Transl?Med2009，1：1-8)。該人工血小板使用了PLGA-PLL作為高分子載體的疏水內核，PEG作為親水的冠狀外層，將GRGDS五肽接枝到PEG上。通過靜脈給藥，負載多肽的納米止血顆粒能夠靶向性與激活的血小板結合，促進血小板聚集并進一步激發凝血機制，快速止血的目的。在小鼠的股動脈受傷模型和肝臟的內出血模型中(Shoffstall?AJ，Atkins?KT，Groynom?RE，et?al.Intravenous?hemostatic?nanoparticles?increase?survival?following?blunt?trauma?injury.Biomacromolecules2012，13：3850-3857)均顯示了很好的止血效果。此外，該人工血小板在室溫下穩定存在。在形成血栓的過程中與血塊合并在一起；24小時內，人工血小板已經完全被吸收；在使用后的7天內，沒有發現明顯的副作用。但是，該人工血小板存在合成方法相對復雜的缺點。

發明內容

在上述背景下，本發明利用高分子聚合物PLGA(FDA批準藥用輔料)、PEG和RGD三肽設計合成出一種新型的靜脈用全身性納米止血藥，因此，本發明目的在于提供一種新型的PLGA-PEG嵌段共聚物負載RGD的人工血小板PLGA-PEG-RGD。

本發明所提供的PLGA-PEG嵌段共聚物負載RGD的人工血小板PLGA-PEG-RGD，是由高分子聚合物聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)連接聚乙二醇(PEG)再連接RGD得到的。

其分子結構式如式I所示，

(式I)

其中，x代表PLGA中乳酸的個數，x＝233-400；y代表PLGA中羥基乙酸的個數，y＝233-400；n代表聚乙二醇的(CH₂-CH₂-O)片段的個數，n＝20-134。

所述PLGA型號優選為Resomer503H(50∶50lactic?to?glycolic?acid?ratio，Mw＝25kDa)；PEG型號優選為異官能團聚乙二醇(NH₂-PEG-COOH，Mw＝3400Da)。

所述人工血小板PLGA-PEG-RGD為納米顆粒。

本發明還提供了一種制備上述人工血小板PLGA-PEG-RGD的方法，可包括以下步驟：

步驟一：PLGA-NHS的合成

根據以下化學方程式，將端羧基的PLGA(Resomer503H)和NHS合成活化酯PLGA-NHS；

式中x、y的限定與前述相同；

步驟二：PLGA-PEG嵌段共聚物PLGA-PEG-COOH的合成