[發(fā)明專利]用于純化低分子肝素的陰離子交換色譜填料，其制備方法，其填充的色譜柱及純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310280819.3
• 申請日: 2013-07-05
• 公開（公告）號: CN104275166A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 穆寧;劉輝;孫國威
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫加萊克色譜科技有限公司
• 主分類號: B01J20/285
• 分類號: B01J20/285;B01J20/30;B01D15/08;B01D15/36;G01N30/06
• 代理公司: 北京漢德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11328
• 代理人: 莊一方;徐馳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種陰離子交換色譜填料，其制備方法，其填充而成的陰離子交換色譜柱及使用該陰離子交換色譜柱進(jìn)行純化的方法，尤其適用于純化低分子肝素。

背景技術(shù)

肝素是一種硫酸氨基葡聚糖，屬酸性黏多糖類物質(zhì)。作為一種抗凝劑，肝素在體內(nèi)外都有抗凝血作用。臨床上應(yīng)用的肝素制劑分為普通的未分段肝素和低分子肝素兩大類，其中低分子肝素（Low?Molecular?Weight?Heparin，LMWH）的平均分子量小于5000Da。和普通肝素相比，低分子肝素同樣具有抗血栓作用，而出血的危險(xiǎn)較低。低分子肝素還具有半衰期長、量效關(guān)系明確、生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)，正廣泛應(yīng)用于血栓栓塞性疾病的預(yù)防及治療，其有效性和安全性均優(yōu)于普通肝素。

肝素通常是從豬或牛的肺、腸黏膜中提取而來，低分子肝素是由普通肝素解聚制備而成的。為了在去除雜質(zhì)的同時(shí)盡可能保留肝素的活性，色譜純化是低分子肝素生產(chǎn)過程中最重要的步驟之一。低分子肝素帶有負(fù)電荷，所以可采用陰離子交換色譜法進(jìn)行純化。但是用目前純化用的陰離子交換色譜填料填充成色譜柱后，色譜柱的動(dòng)態(tài)吸附容量較低，且耐壓性能不佳，只能在較低流速下使用，不能適應(yīng)高效生產(chǎn)的要求。因此，目前的低分子肝素的純化效率較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于純化低分子肝素的陰離子交換色譜填料，其填充而成的色譜柱動(dòng)態(tài)吸附容量較高；且耐壓性能較好，適于較高流速下使用。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備陰離子交換色譜填料的方法，其制備出的陰離子交換色譜填料填充而成的色譜柱動(dòng)態(tài)吸附容量較高；且耐壓性能較好，適于較高流速下使用。

本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供用于純化的低分子肝素的陰離子交換色譜柱，其動(dòng)態(tài)吸附容量較高；且耐壓性能較好，適于較高流速下使用。

本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供純化低分子肝素的方法，其純化效率較高。

本發(fā)明提供了用于純化低分子肝素的陰離子交換色譜填料，陰離子交換色譜填料的基質(zhì)為交聯(lián)聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇雙酯的多孔球形顆粒；陰離子交換色譜填料的粒徑范圍包含在30-150μm的范圍中，平均粒徑為50-80μm，孔徑范圍包含在30-180nm的范圍中。

在陰離子交換色譜填料的一種示意性實(shí)施方式中，陰離子交換色譜填料的表面電荷密度為350-2350μmol/g，比表面積為33-95平方米/g，孔隙率為25-86%。

本發(fā)明還提供了制備上述陰離子交換色譜填料的方法，包括：用懸浮聚合法制備聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇雙酯基質(zhì)的微球，對微球進(jìn)行洗滌及篩分，再使用胺類親核試劑在篩分后得到的微球表面鍵合陰離子交換基團(tuán)；其中懸浮聚合法的步驟為：a、在反應(yīng)釜中加入分散穩(wěn)定劑、靜電保護(hù)劑和水，密閉反應(yīng)釜，攪拌反應(yīng)釜中的物料同時(shí)升高釜內(nèi)溫度至60-85℃，直至分散穩(wěn)定劑和靜電保護(hù)劑充分溶解后停止攪拌，得到水相；b、取甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯（GMA）、甲基丙烯酸乙二醇雙酯(EDMA)、致孔劑和引發(fā)劑并將其混合，得到混合物料，將混合物料超聲的同時(shí)攪拌，至引發(fā)劑完全溶解，得到有機(jī)相；c、將水相升溫至30℃，加入有機(jī)相并在30℃下攪拌直至形成均勻油狀乳液體系，得到混合乳液；和d、將混合乳液加熱至75-80℃引發(fā)聚合反應(yīng)，聚合反應(yīng)的時(shí)長為6-30小時(shí)，得到聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇雙酯基質(zhì)的微球。

在制備陰離子交換色譜填料的方法的一種示意性實(shí)施方式中，分散穩(wěn)定劑是聚乙烯醇，分散穩(wěn)定劑與水相的質(zhì)量體積比為0.03-1%，優(yōu)選為0.25%-0.5%；靜電保護(hù)劑是氯化鈉，靜電保護(hù)劑與水相的質(zhì)量體積比為1-16.7%，優(yōu)選為3-5%。

在制備陰離子交換色譜填料的方法的一種示意性實(shí)施方式中，有機(jī)相中致孔劑的體積分?jǐn)?shù)為20-71%；致孔劑由良溶劑和/或不良溶劑組成，良溶劑選自甲苯、異丙苯和二甲苯中的一種或其任意組合；不良溶劑選自異戊醇、正辛醇、異辛醇和正十二醇中的一種或其任意組合。

在制備陰離子交換色譜填料的方法的一種示意性實(shí)施方式中，引發(fā)劑為過氧化苯甲酰或2,2’-偶氮二異戊腈，引發(fā)劑的用量與甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯和甲基丙烯酸乙二醇雙酯兩者用量和的質(zhì)量體積比為0.4-3%，優(yōu)選為0.75-1.5%。

在制備陰離子交換色譜填料的方法的一種示意性實(shí)施方式中，胺類親核試劑為二乙胺、三乙烯四胺、五乙烯六胺、五乙烯六胺或N,N’-二乙基乙二胺。

在制備陰離子交換色譜填料的方法的一種示意性實(shí)施方式中，表面鍵合的反應(yīng)溫度為0-50℃，反應(yīng)時(shí)長為1-10小時(shí)。