[發(fā)明專利]用于純化低分子肝素的陰離子交換色譜填料，其制備方法，其填充的色譜柱及純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310280819.3
• 申請日: 2013-07-05
• 公開（公告）號: CN104275166A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 穆寧;劉輝;孫國威
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫加萊克色譜科技有限公司
• 主分類號: B01J20/285
• 分類號: B01J20/285;B01J20/30;B01D15/08;B01D15/36;G01N30/06
• 代理公司: 北京漢德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11328
• 代理人: 莊一方;徐馳

1.用于純化低分子肝素的陰離子交換色譜填料，其特征在于，所述陰離子交換色譜填料的基質(zhì)為交聯(lián)聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇雙酯的多孔球形顆粒；所述陰離子交換色譜填料的粒徑范圍包含在30-150μm的范圍中，平均粒徑為50-80μm，孔徑范圍包含在30-180nm的范圍中。

2.如權(quán)利要求1所述的陰離子交換色譜填料，其中所述陰離子交換色譜填料的表面電荷密度為350-2350μmol/g，比表面積為33-95平方米/g，孔隙率為25-86%。

3.制備如權(quán)利要求1所述的陰離子交換色譜填料的方法，包括：用懸浮聚合法制備聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇雙酯基質(zhì)的微球，對所述微球進(jìn)行洗滌及篩分，再使用胺類親核試劑在所述篩分后得到的微球表面鍵合陰離子交換基團(tuán)；

其特征在于，所述懸浮聚合法的步驟為：

a、在反應(yīng)釜中加入分散穩(wěn)定劑、靜電保護(hù)劑和水，密閉所述反應(yīng)釜，攪拌所述反應(yīng)釜中的物料同時升高釜內(nèi)溫度至60-85℃，直至所述分散穩(wěn)定劑和所述靜電保護(hù)劑充分溶解后停止攪拌，得到水相；

b、取甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯、甲基丙烯酸乙二醇雙酯、致孔劑和引發(fā)劑并將其混合得到混合物料，將所述混合物料超聲的同時攪拌，至所述引發(fā)劑完全溶解，得到有機(jī)相；

c、將所述水相升溫至30℃，加入所述有機(jī)相并在30℃下攪拌直至形成均勻油狀乳液體系，得到混合乳液；和

d、將所述混合乳液加熱至75-80℃引發(fā)聚合反應(yīng)，所述聚合反應(yīng)的時長為6-30小時，得到所述聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇雙酯基質(zhì)的微球。

4.如權(quán)利要求3所述的制備陰離子交換色譜填料的方法，其中所述分散穩(wěn)定劑是聚乙烯醇，所述分散穩(wěn)定劑與所述水相的質(zhì)量體積比為0.03-1%；所述靜電保護(hù)劑是氯化鈉，所述靜電保護(hù)劑與所述水相的質(zhì)量體積比為1-16.7%。

5.如權(quán)利要求3所述的制備陰離子交換色譜填料的方法，其中所述有機(jī)相中，所述致孔劑的體積分?jǐn)?shù)為20-71%；所述致孔劑是良溶劑和不良溶劑中的一種或其組合，所述良溶劑選自甲苯、異丙苯和二甲苯中的一種或其任意組合；所述不良溶劑選自異戊醇、正辛醇、異辛醇和正十二醇中的一種或其任意組合。

6.如權(quán)利要求3所述的陰離子交換色譜填料的制備方法，其中所述引發(fā)劑為過氧化苯甲酰或2,2’-偶氮二異戊腈，所述引發(fā)劑的用量與所述甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯和所述甲基丙烯酸乙二醇雙酯兩者用量和的質(zhì)量體積比為0.4-3%。

7.如權(quán)利要求3所述的制備陰離子交換色譜填料的方法，其中所述胺類親核試劑為二乙胺、三乙烯四胺、五乙烯六胺、五乙烯六胺或N,N’-二乙基乙二胺。

8.如權(quán)利要求3所述的制備陰離子交換色譜填料的方法，其中所述表面鍵合的反應(yīng)溫度為0-50℃，反應(yīng)時長為1-10小時。

9.用于純化低分子肝素的陰離子交換色譜柱，其特征在于，使用權(quán)利要求1所述的陰離子交換色譜填料填充而成。

10.純化低分子肝素的方法，其特征在于，將待純化的低分子肝素樣品通過權(quán)利要求9所述的陰離子交換色譜柱進(jìn)行純化。