[發明專利]一種基于抗原共價結合殼聚糖納米粒的鼻腔免疫載體

有效

• 申請號: 201310278891.2
• 申請日: 2013-07-04
• 公開（公告）號: CN104274830A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 張奇志;劉青鋒;鄭曉瑤;邵夏炎;蔣新國
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K39/39;A61K47/48
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種基于抗原共價結合殼聚糖納米粒的鼻腔免疫載體及其制備方法。

背景技術

近年來，由細菌、真菌、病毒等引起的呼吸道傳染病頻繁發生，如2003年爆發的SARS、2005年爆發的H5N1禽流感、2009年的甲型H1N1流感大流行以及最近的H7N9新型禽流感等，嚴重威脅著人類的健康；因此，如何預防呼吸道傳染病的蔓延仍然是醫藥工作者面臨的艱巨任務。而目前尚缺乏有效的大面積空氣消毒方法，故其預防重點在于相應疫苗的接種。

呼吸道傳染病主要是病原體進入或感染呼吸道粘膜引起，而鼻粘膜是最先接觸吸收性抗原物質的部位，因此，鼻腔成為疫苗接種的最理想部位。鼻腔作為疫苗接種部位有諸多優點：(1)接種方便，可同時實現鼻粘膜免疫、遠位粘膜免疫和系統免疫；(2)鼻腔內有較多的免疫活性部位，如動物的鼻相關淋巴樣組織(NALT，相當于人的Waldeyer's環)，其中含多種免疫活性細胞，如T細胞、B細胞、M細胞、樹突細胞及巨噬細胞等；(3)鼻粘膜上皮僅由一層纖毛柱狀上皮細胞構成，粘膜下有豐富的淋巴管，有利于疫苗的透過，并經淋巴引流至頸部淋巴結，觸發免疫應答；(4)鼻腔內酶的種類和數量遠低于胃腸道，有利于減少蛋白、多肽等大分子抗原的變性或失活。

然而，抗原溶液直接滴鼻免疫原性較低，難以誘導機體產生長期的保護性抗體，必須利用合適的免疫佐劑或疫苗載體才能實現有效的鼻腔免疫；其中，由殼聚糖及其衍生物制備的納米粒因具有良好的生物相容性、可穿透粘膜上皮、易被抗原提呈細胞(APC)識別等特點已被用于粘膜免疫佐劑。

目前，所述殼聚糖納米粒作為粘膜免疫佐劑的主要方式是將抗原包封于納米粒內部，但該種方法存在明顯的缺點：(1)包封率較低；(2)抗原突釋明顯，且釋放不完全；(3)能夠與APC接觸并被APC識別和提呈的抗原較少，使其免疫效果不理想。

因此，當前迫切需要一種基于抗原共價結合殼聚糖納米粒的鼻腔免疫載體；該載體可顯著提高抗原利用率，增加抗原鼻腔給藥后的頸部淋巴結靶向性，增強其粘膜和系統免疫應答。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷和不足，提供一種新的鼻腔免疫載體，具體涉及一種基于抗原共價結合殼聚糖納米粒的鼻腔免疫載體及其制備方法；該載體可顯著提高抗原利用率，增加抗原鼻腔給藥后的頸部淋巴結靶向性，增強其粘膜和系統免疫應答。

本發明的基于抗原共價結合殼聚糖納米粒的鼻腔免疫載體，其特征在于，由納米粒和抗原組成，所述抗原通過共價鍵結合在納米粒表面，其中，所述納米粒采用殼聚糖及其衍生物為材料制備，所述抗原選自傳染疾病或腫瘤相關的蛋白或多肽；

本發明中，所述的殼聚糖的分子量為5000~500000，優選為20000~200000，脫乙酰度為50%~95%，優選為70%~90%；

本發明中，所述的殼聚糖衍生物選自季銨化殼聚糖、羧基殼聚糖、巰基化殼聚糖、PEG化殼聚糖、殼聚糖接枝聚合物、羥基化殼聚糖、酰化殼聚糖、透明質酸化殼聚糖、酯化殼聚糖等基于殼聚糖材料的修飾物，優選為季銨化殼聚糖和PEG化殼聚糖；

所述季銨化殼聚糖的分子量為5000~600000，優選為10000~400000；季銨化程度為5%~60%，優選為15%~45%；

所述PEG化殼聚糖的分子量為5000~600000，優選為10000~300000；PEG取代度為3%~50%，優選為10%~30%；

本發明中，所述的殼聚糖及其衍生物制備的納米粒粒徑為50~1000?nm，優選為50~400?nm；

本發明中，所述抗原選自與流感、麻疹、水痘、風疹、流腦、流行性腮腺炎、肺結核等呼吸道傳染病相關的蛋白或多肽；

本發明中，所述抗原選自與艾滋病、乙型肝炎、梅毒、淋病、滴蟲性陰道炎、細菌性陰道炎、阿米巴病、生殖器皰疹等性傳染疾病相關的蛋白或多肽；

本發明中，所述抗原選自與腫瘤免疫治療相關的蛋白或多肽；

本發明中，抗原與殼聚糖納米粒的連接方式包括酰胺鍵、硫醚鍵、二硫鍵、酯鍵等任何以共價鍵結合的方式。

本發明通過下述方法將抗原與殼聚糖納米粒子共價連接：

（1）以離子交聯法制備殼聚糖或其衍生物的納米粒；

（2）以碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺活化抗原蛋白或者多肽的羧基；

（3）將所述納米粒與活化的抗原混合反應一定時間，將抗原共價連接在納米粒表面，制得抗原共價結合的殼聚糖納米粒，得到基于抗原共價結合殼聚糖納米粒的鼻腔免疫載體；

或，