[發明專利]一種B族鏈球菌熒光PCR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310275655.5
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN103409509A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 李榮宇;劉中華;王國強;白楊;張旭
• 申請（專利權）人: 江蘇碩世生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;G01N21/64
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;韓小雷

1.一種B族鏈球菌熒光PCR檢測試劑盒，包括以下各組分：包括PCR反應液、酶混合液、B族鏈球菌反應液、內參質粒、陽性對照和陰性對照。

2.根據權利要求1所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的B族鏈球菌反應液包括以下組分：

組分（1）：由一對檢測B族鏈球菌的引物和一條檢測B組鏈球菌的探針組成；其中，兩條引物的堿基序列分別為SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示；探針的堿基序列為SEQ?ID?No.3所示，該探針的5′端標記有熒光報告基團，3′端標記有熒光淬滅基團；

組分（2）：由一對檢測人TOP3A基因片段的引物和一條檢測人TOP3A基因片段的探針組成；其中，兩條引物的堿基序列分別為SEQ?ID?No.4和SEQ?ID?No.5所示；探針的堿基序列為SEQ?ID?No.6所示，該探針的5′端標記有熒光報告基團，3′端標記有熒光淬滅基團。

3.根據權利要求2所述的熒光PCR檢測試劑盒，所述的熒光報告基團選自FAM、HEX、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas?Red和LC?RED640中任意兩種熒光報告基團，且組分（1）和組分（2）中的熒光報告基團不同；所述的熒光淬滅基團選自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1和Tamra等任意兩種熒光淬滅基團。

4.根據權利要求2所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的檢測B族鏈球菌的引物及探針的配比為：SEQ?ID?No.1:SEQ?ID?No.2:SEQ?ID?No.3為5:5:2；優選的，引物SEQ?ID?No.1為500nM，SEQ?ID?No.2為500nM，探針SEQ?ID?No.3為200nM。

5.根據權利要求2所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的檢測人TOP3A基因片段的引物及探針的配比分別為：SEQ?ID?No.4:SEQ?ID?No.5:SEQ?ID?No.6為5:5:2；優選的，引物SEQ?ID?No.1為500nM，SEQ?ID?No.2為500nM，探針SEQ?ID?No.3為200nM。

6.根據權利要求1所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的PCR反應液包括5×緩沖液、25mM?MgCl₂和10mM?dNTPs。

7.根據權利要求1所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的酶混合液包括包括Taq酶和UNG酶，所說的Taq酶為熱啟動Taq酶，所說的UNG酶為尿嘧啶-N-糖基化酶。

8.根據權利要求1所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的內參質粒為依照人TOP3A基因片段的序列合成的質粒。

9.根據權利要求1所述的熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的陽性對照為滅活的B族鏈球菌培養液；所述的陰性對照為無菌水。

10.權利要求1-9所述的熒光PCR檢測試劑盒在檢測B族鏈球菌中的應用。