[發(fā)明專利]一種利用氧載體促進(jìn)畢赤酵母高密度發(fā)酵的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310271420.9
• 申請(qǐng)日: 2013-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103333921A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張玲華;明飛平;鄺哲師;夏楓耿;葉明強(qiáng);趙祥杰;楊軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P1/02
• 分類號(hào): C12P1/02;C12R1/84
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種利用氧載體促進(jìn)畢赤酵母高密度發(fā)酵的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.將畢赤酵母菌株復(fù)活、擴(kuò)大培養(yǎng)得到發(fā)酵菌種；

S2.向發(fā)酵菌種中添加甘油，保存?zhèn)溆茫?/p>

S3.將S2所述添加了甘油的發(fā)酵菌種以1.0～1.2%接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)得發(fā)酵液；按體積百分?jǐn)?shù)計(jì)，分別在培養(yǎng)0～3h、24～27h、72～75h、96～98?h時(shí)向發(fā)酵液中添加分別占發(fā)酵液0.5～1%正已烷，0.5～1%正十二烷，0.08～0.2%?吐溫-80和0.1～0.5%豆油；培養(yǎng)72～75小時(shí)后，加入甲醇進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)直至發(fā)酵培養(yǎng)6~8天終止發(fā)酵。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，分別在培養(yǎng)2～3h、26～27h、74～75h、97～98?h時(shí)向發(fā)酵液中添加分別占發(fā)酵液0.8～1%正已烷，0.8～1%正十二烷，0.15～0.2%?吐溫-80和0.3～0.5%豆油。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，分別在培養(yǎng)2h、26h、74h、97?h時(shí)向發(fā)酵液中添加分別占發(fā)酵液0.8%正已烷，0.8%正十二烷，0.15%?吐溫-80和0.3%豆油。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟S2所述甘油的添加量按照發(fā)酵菌種體積量的12～15%確定。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟S1所述畢赤酵母菌株復(fù)活和擴(kuò)大培養(yǎng)得到發(fā)酵菌種的具體步驟為：

S1.將畢赤酵母菌種接種到種子平板固體培養(yǎng)基上，劃線分離，培養(yǎng)得單細(xì)胞菌落；

S2.挑出單細(xì)胞菌落，接種在種子斜面固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)長(zhǎng)出菌體；

S3.將菌體以1～2%的接種量接種到菌種液體培養(yǎng)基中，28～32??????????????????????????????????????????????℃、200～250rpm條件下培養(yǎng)16～20小時(shí)，培養(yǎng)至OD₆₀₀為1.0～1.2，停止培養(yǎng)，所得菌液為發(fā)酵菌種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于，所述種子平板固體培養(yǎng)基為YPD固體培養(yǎng)基；種子斜面固體培養(yǎng)基為YPD斜面固體培養(yǎng)基；菌種液體培養(yǎng)基為YPD液體培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟S3所述甲醇的添加方式為以流加方式添加含10～12ml/L?微量鹽溶液的甲醇，起始添加濃度為0.1～0.3%/h；隨著酵母對(duì)甲醇碳源的適應(yīng)性利用和菌數(shù)生長(zhǎng)的增加，逐漸以0.3～0.5%/h、0.5～0.7%/h、0.7～0.9%/h梯度提高甲醇流加速率，至終濃度為1～2%/h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟S3所述發(fā)酵培養(yǎng)的過(guò)程中，攪拌轉(zhuǎn)速為300～320rpm，通風(fēng)量為1：0.8～1vvm，控制DO在40～80%。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟S1所述畢赤酵母為畢赤酵母GS115、畢赤酵母KM71或畢赤酵母SMD1168。