[發明專利]4H?[1]?苯并吡喃[4,3?b]噻吩?2?甲酸酰肼及其衍生物在糖蛋白特異性熒光檢測中的應用

有效

• 申請號: 201310268939.1
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN104251849B
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發明（設計）人: 金利泰;叢維濤;朱忠欣;洪國贏
• 申請（專利權）人: 溫州安得森生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種凝膠上糖蛋白特異性熒光檢測方法，其包括步驟：

1)將經SDS-PAGE電泳后含蛋白質樣品的凝膠置于固定液中固定10～60min，棄固定液；

2)在高碘酸溶液里氧化10～40min，其中高碘酸溶液為含重量體積比0.1～1％的高碘酸及按體積比0.5～5％的乙酸水溶液，然后用按體積比0.5～5％的乙酸水溶液沖洗2～5次，每次1～10min；

3)加入染色液1～40min，其中染色液為含重量體積比0.0001～0.001％的4H-[1]-苯并吡喃[4，3-b]噻吩-2-甲酸酰肼或其衍生物及按體積比0.5～5％的乙酸水溶液，其中所述衍生物為4H-[1]-苯并吡喃[4，3-b]噻吩-2-甲酸酰肼的鈉鹽、鉀鹽或銨鹽；

4)加入洗脫液，洗脫液為體積比0.5～5％的乙酸、10～70％乙醇及0.5～2％乙醇胺的水溶液，洗脫1～3次，每次1～10min；

5)檢測。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中凝膠固定時間為30min，固定液為按體積比40％乙醇和10％乙酸的溶液。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中凝膠在高碘酸溶液里氧化時間為20min，其中高碘酸溶液為含重量體積比0.5％的高碘酸及按體積比1％的乙酸水溶液，然后用按體積比1％的乙酸水溶液沖洗3次，每次5min。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)染色液組成為按重量體積比為0.0002％4H-[1]-苯并吡喃[4，3-b]噻吩-2-甲酸酰肼或其衍生物及按體積比1％的乙酸水溶液。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)洗脫液組成為按體積比1％乙酸、40％乙醇及1％乙醇胺的水溶液。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)染色時間為15min。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)洗脫時間為20min。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5)是在激光掃描儀下觀察染色后的糖蛋白。