[發明專利]一種沙門氏菌LAMP引物組和試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201310268305.6
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN103320434A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 石磊;李艷莉;王珊珊;趙一鳴;張志剛;蘇永裕;孟赫誠;閆鶴
• 申請（專利權）人: 華南理工大學;廈門銀祥集團有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/10;C12R1/42
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;蘇運貞

技術領域

本發明屬于食品安全的分子生物學檢測方法領域，特別涉及一種沙門氏菌（salmonella）LAMP引物組和試劑盒及檢測方法。

背景技術

沙門氏菌是一種常見的人獸共患病原菌，不僅引起各種動物疾病，而且與人類多種疾病有關，其中，由沙門氏菌引起的食物中毒病例在食物中毒中居于前列。

沙門氏菌(salmonella)屬的成員可感染多種動物和人,大部分具有很強的致病性。沙門氏菌感染因其對人類、畜禽飼養業造成的危害,而被廣泛重視。據世界衛生組織報告，世界各國沙門氏菌食物污染日益增多，造成巨大經濟損失，嚴重威脅著人們的身體健康和生命安全，因而沙門氏菌已被列為食品中致病菌檢測的一個重要對象和一項重要指標，社會各檢疫部門也加大了對沙門氏菌的防制及監控力度。在我國，由沙門氏菌引起的食物中毒屢居首位。據資料統計，在我國細菌性食物中毒中，70%～80%是由沙門氏菌引起，而在引起沙門氏菌中毒的食品中，90%以上是肉類等動物性產品。

為了尋求快速、準確、簡便、微量的檢驗方法,國內外學者進行了大量的研究,從以傳統方法為基礎發展到以免疫學為基礎的或以分子生物學為基礎的快速檢測方法,并在實踐檢驗中不斷取得新進展。

目前，包括我國在內的許多國家對沙門氏菌的檢測普遍采用傳統培養方法，報告檢驗結果大致需4～5d，加之檢測方法繁瑣、費時費力，不僅成為檢驗部門的一項沉重負擔，而且越來越不能滿足日益發展的國際貿易的需要。20世紀50年代以來，為了尋求快速、準確、簡便、微量的檢測方法，國內外學者進行了大量的研究，從以傳統方法為基礎發展到以免疫學為基礎的或以分子生物學為基礎的快速檢測方法，并在實踐檢驗中不斷取得新進展。

以抗體為基礎的ELISA方法和免疫熒光標記方法將檢測時間縮短了一半，靈敏性高和但特異性差；以核酸為基礎的PCR技術由于靈敏、簡單、快速和特異已被廣泛用于沙門氏菌檢測，但檢測樣品復雜，對假陰性的檢測結果沒有控制，存在漏檢的可能。因沙門氏菌危害嚴重，漏檢造成的危害無法估量。為減少漏檢造成概率，史賢明教授等申請一項添有擴增內標的沙門氏菌PCR檢測方法（專利號：200710040001.9），通過內標的檢測結果判斷是否發生假陰性。但PCR擴增需要昂貴的儀器，很多基層檢測單位不具備相應檢測條件。因此，建立一種快速、準確、高通量且對儀器要求不高的的檢測試劑盒及檢測方法成為目前急需解決的問題。

沙門氏菌作為食品衛生檢驗一項重要目的菌有著重要的意義，提高沙門氏菌檢出率,縮短檢測時間，防止因樣品復雜性、抑制因子多等原因等抑制反應而發生漏檢的現象發生，對保證食品的安全性和消費者的身體健康具有重要的意義。

發明內容

為克服上述現有技術的缺點和不足，本發明的首要目的在于提供一種沙門氏菌LAMP引物組，包含檢測引物組及內標引物組。

本發明的另一目的在于提供含有上述引物組的沙門氏菌LAMP檢測試劑盒。該試劑盒可根據內標檢測結果判斷檢測結果是否為假陰性。

本發明的再一目的在于提供運用上述檢測試劑盒的沙門氏菌LAMP檢測方法。可根據檢測內標引物組是否有擴增來判斷是否有假陰性檢測結果。為現有技術無法判斷檢測結果是否是假陰性結果的情況，提供一種新的LAMP檢測方法。不僅降低檢測成本，擺脫對昂貴儀器的依賴，同時提高檢測的準確性。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種沙門氏菌LAMP引物組，包含檢測引物組及內標引物組。可根據檢測引物組和內標引物組是否有擴增來判斷是否有假陰性沙門氏菌檢測結果。

檢測引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環引物，其核苷酸序列分別如下所示：

SafimI-F3：CACTAAATCCGCCGATCAA；

SafimI-B3：CAACGGTGAGGAGGTATTATC；

SafimI-FIP：TTCGGATCGCAGTCATTCAGGCGATTGGTGATACGACCG；

SafimI-BIP：GGTCAGGCAGATAACACCAACATTGCGGTGGTGCTATTATC；

SafimI-LF：TGGTGAAAGGCACCTGTG；

SafimI-LB：ATTTGCTGGCTGTCTCCTC。

內標引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環引物，其核苷酸序列分別如下所示：

SainvA-F3：CGAAGCGTACTGGAAAGG；

SainvA-B3：ATCACCAATGGTCAGCATG；