[發明專利]一種沙門氏菌LAMP引物組和試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201310268305.6
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN103320434A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 石磊;李艷莉;王珊珊;趙一鳴;張志剛;蘇永裕;孟赫誠;閆鶴
• 申請（專利權）人: 華南理工大學;廈門銀祥集團有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/10;C12R1/42
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;蘇運貞

1.一種沙門氏菌LAMP引物組，其特征在于包含檢測引物組及內標引物組；可根據檢測引物組和內標引物組是否有擴增來判斷是否有假陰性沙門氏菌檢測結果；

所述的檢測引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環引物，其核苷酸序列分別如下所示：

SafimI-F3：CACTAAATCCGCCGATCAA；

SafimI-B3：CAACGGTGAGGAGGTATTATC；

SafimI-FIP：TTCGGATCGCAGTCATTCAGGCGATTGGTGATACGACCG；

SafimI-BIP：GGTCAGGCAGATAACACCAACATTGCGGTGGTGCTATTATC；

SafimI-LF：TGGTGAAAGGCACCTGTG；

SafimI-LB：ATTTGCTGGCTGTCTCCTC；

所述的內標引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環引物，其核苷酸序列分別如下所示：

SainvA-F3：CGAAGCGTACTGGAAAGG；

SainvA-B3：ATCACCAATGGTCAGCATG；

SainvA-FIP：CCGGCAATAGCGTCACCTTGAAAGCCAGCTTTACGGT；

SainvA-BIP：TTGGCGGTATTTCGGTGGGTATAAGTAGACAGGGCGGAG；

SainvA-LF：ACTTCATCGCACCGTCAA；

SainvA-LB：GACTCGCCATGGTATGGATT。

2.一種沙門氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于由以下組分組成：權利要求1所述的沙門氏菌LAMP引物組；DNA聚合酶；LAMP反應液；核酸熒光染料；內標；陽性對照和陰性對照。

所述的DNA聚合酶為Bst?DNA聚合酶；

所述LAMP反應液含有8mM?dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液和120mM?MgSO₄水溶液三種成分；

所述的熒光核酸染料為10×SYBR?Green?I；

所述的內標為含有沙門氏菌invA基因片段的T載體克隆；

所述的陽性對照為含有沙門氏菌fimI基因片段的T載體克隆；

所述的陰性對照為超純水。

3.根據權利要求2所述的沙門氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的含有沙門氏菌invA基因片段的T載體克隆，其制備方法為：以分離鑒定的沙門氏菌為模板，利用內標引物組的外引物SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8進行擴增，所得invA基因擴增片段序列SEQ?ID?NO:14，回收該擴增片段，利用常規方法連接到T載體中，即獲得含有沙門氏菌invA基因片段的T載體克隆。

4.根據權利要求2所述的沙門氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的含有沙門氏菌fimI基因片段的T載體克隆，通過下述方法制備：以分離鑒定的沙門氏菌為模板，利用檢測引物組的外引物SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2進行擴增，所得fimI基因擴增片段序列SEQ?ID?NO:13，回收該擴增片段，利用常規方法連接到T載體中，即獲得含有沙門氏菌fimI基因片段的T載體克隆。

5.根據權利要求2所述的沙門氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的沙門氏菌LAMP引物組中檢測引物組及內標引物組的引物濃度的比例如下：外引物、內引物、環引物的摩爾比為：1-2：4-8：2-4。

6.根據權利要求2所述的沙門氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的LAMP反應液中8mM?dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液和120mM?MgSO₄水溶液三種成分的體積比是7：4：3。