[發(fā)明專利]一種注射用膠原蛋白水凝膠及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310268278.2
• 申請(qǐng)日: 2013-06-28
• 公開（公告）號(hào): CN103333508A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范代娣;馬曉軒;張婧婧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西巨子生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C08L89/00
• 分類號(hào): C08L89/00;C08J3/075;C08J3/24;A61L27/24;A61L27/52
• 代理公司: 西安新思維專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 61114
• 代理人: 李罡

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明涉及一種水凝膠，具體涉及一種注射用膠原蛋白水凝膠及其制備方法。

背景技術(shù)

膠原蛋白是一種生物高分子物質(zhì)，廣泛存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)，是結(jié)締組織中非常重要的一類結(jié)構(gòu)蛋白，也是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分。膠原蛋白具有一般蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，可以發(fā)生氨基反應(yīng)、羧基反應(yīng)、羥基反應(yīng)、顯色反應(yīng)、交聯(lián)反應(yīng)等，自身具有特定的等電點(diǎn)。而且由于膠原蛋白分子表面有許多極性側(cè)基，因此它的吸水性能非常良好，可以結(jié)合自身質(zhì)量10倍以上的水，而其本身不溶于水。

類人膠原蛋白（Human-like?Collagen）是將人體膠原蛋白的mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，經(jīng)酶切后的一段基因重組于E.coli（大腸桿菌）內(nèi)，經(jīng)過高密度發(fā)酵、分離、復(fù)性、純化工藝生產(chǎn)的一種高分子生物蛋白。類人膠原蛋白具有良好的生物吸收性、生物兼容性、細(xì)胞粘附性、促新細(xì)胞形成和促上皮細(xì)胞形成的功能。并且類人膠原蛋白易溶于水，該特性也極大的擴(kuò)寬了其應(yīng)用范圍。同時(shí)，類人膠原蛋白與動(dòng)物膠原不同，其pH為6.5-7.5，接近人體生理酸堿度，不會(huì)對(duì)人體酸堿平衡造成影響，也不會(huì)破壞細(xì)胞生長(zhǎng)與粘附。雖然類人膠原蛋白作為組織填充材料不會(huì)引起明顯的炎癥反應(yīng)，但是未經(jīng)交聯(lián)的膠原蛋白在體內(nèi)的降解速度較快，存留時(shí)間比較短，因此也限制了它在填充材料方向的應(yīng)用。

關(guān)于膠原蛋白技術(shù)的交聯(lián)技術(shù)已經(jīng)有公開專利。CN101005865A?中公開了一種膠原蛋白海綿的制備方法，以戊二醛進(jìn)行交聯(lián)，但產(chǎn)品中會(huì)有高濃度的戊二醛殘留，會(huì)引起強(qiáng)烈的生物毒性從而危害人體健康。

專利CN101864178A公開了一種采用辣根過氧化物酶作為交聯(lián)劑交聯(lián)含有酚羥基基團(tuán)的天然或合成蛋白質(zhì)/多肽，生理?xiàng)l件下可快速形成化學(xué)交聯(lián)的可注射水凝膠的方法。該水凝膠生物相容性好、可降解，且降解產(chǎn)物人體也可吸收，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。但該方法中交聯(lián)反應(yīng)必須有過氧化物的存在，而過氧化物會(huì)對(duì)人體造成一定的損害。

專利CN101234216B公開了一種膠原基冷凍凝膠的制備方法，利用醛化多糖與膠原蛋白上的氨基反應(yīng)生成希夫堿的反應(yīng)，低溫條件下，使膠原與醛化多糖交聯(lián)反應(yīng)一段時(shí)間，而后再解凍形成醛化多糖-膠原基多孔凝膠。但醛化多糖如雙醛淀粉、雙醛硫酸軟骨素等在常溫下不易溶解，同時(shí)存在一定的細(xì)胞毒性，而且該方法低溫下反應(yīng)時(shí)間為1-7天，之后要將產(chǎn)物解凍，較為耗時(shí)，生產(chǎn)效率比較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種保留時(shí)間較長(zhǎng)、無生物學(xué)毒性的注射用膠原蛋白水凝膠及其制備方法。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種注射用膠原蛋白水凝膠，其特征在于：

是以膠原蛋白為原料，使用交聯(lián)劑使原料分子間或分子內(nèi)發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成的水凝膠。

所述的膠原蛋白選自從動(dòng)物組織中提取的全長(zhǎng)膠原蛋白、膠原蛋白多肽、明膠；

或采用基因工程方法生產(chǎn)的重組膠原蛋白、類人膠原蛋白；

所述的交聯(lián)劑選自1，4-丁二醇二縮水甘油基醚、乙二醇二縮水甘油基醚、1，6-己二醇二縮水甘油醚、聚乙二醇二縮水甘油基醚、1，2，7，8-?二環(huán)氧辛烷、碳化二亞胺；

或谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶。

一種注射用膠原蛋白水凝膠的制備方法，其特征在于：

由以下步驟實(shí)現(xiàn)：

步驟一：將膠原蛋白溶解于堿性溶液中，制備得到膠原蛋白質(zhì)量濃度為5%-20%的溶液；

步驟二：加入環(huán)氧類化合物作交聯(lián)劑，添加量為溶液質(zhì)量的0.5%-10%，反應(yīng)溫度35-55℃，反應(yīng)時(shí)間10-48小時(shí)，放置冷卻；

步驟三：將所得產(chǎn)物進(jìn)行粉碎；

步驟四：將得到的顆粒產(chǎn)物置于其體積10-50倍的緩沖液中清洗1-2天；

步驟五：離心除去緩沖液，收集沉淀得到顆粒狀凝膠。

步驟一中，膠原蛋白選自從動(dòng)物組織中提取的全長(zhǎng)膠原蛋白、膠原蛋白多肽、明膠，或采用基因工程方法生產(chǎn)的重組膠原蛋白、類人膠原蛋白；

堿性溶液選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉溶液，摩爾體積濃度為0.05-0.5mol/L；

步驟二中，環(huán)氧類化合物選自1，4-丁二醇二縮水甘油基醚、乙二醇二縮水甘油基醚、1，6-己二醇二縮水甘油醚、聚乙二醇二縮水甘油基醚、1，2，7，8-?二環(huán)氧辛烷、碳化二亞胺；

步驟三中，粉碎方式選自擠壓、研磨、切割；

步驟四中，緩沖液為磷酸鹽緩沖液，摩爾體積濃度為0.01-0.05?mol/L，pH值為6-7。

一種注射用膠原蛋白水凝膠的制備方法，其特征在于：

由以下步驟實(shí)現(xiàn)：