[發明專利]番茄植物干細胞分離培養提取與口服液、飲料和白酒的制備方法

無效

• 申請號: 201310267591.4
• 申請日: 2013-07-01
• 公開（公告）號: CN103320379A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 林樹芳
• 申請（專利權）人: 林樹芳
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12G3/04;A23L1/29;A23L2/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明番茄植物干細胞分離培養提取與口服液、飲料和白酒的制備方法：

1.離體材料的制備

(1)優選無化肥農藥污染，純農家肥栽培的番茄，外皮已呈紅色，內心尚未熟透，表皮無劃傷的番茄果實，用水沖洗表面附著物，放進120mg/L的L-抗壞血酸液中浸泡1分鐘，然后在放進1％升的苯菌靈溶液中殺菌10分鐘，用無菌水沖洗10分鐘，在放入75％的乙醇液中殺菌1分鐘，用無菌水沖洗在放入30％升的過氧化氫液中殺菌10分鐘，然后在用無菌水沖洗10分鐘。

2.優選固態培養基的制備方法：

(1)硝酸鉀2500mg/L，硫酸鎂122mg/L，硫酸錳11mg/L，硫酸鋅2.5mg/L，硫酸銅0.025mg/L，硫酸胺135mg/L。氯化鈣112mg/L，碘化鉀0.7mg/L，氯化鈷0.025mg/L，磷酸二氫鈉132mg/L，硼酸2.6mg/L，鉬酸鈉0.23mg/L，煙酸2.0mg/L，吡哆醇2.1mg/L，L-抗壞血酸53mg/L，檸檬酸78mg/L，L-天冬氨酸140mg/L，L-精氨酸180mg/L，甘氨酸75mg/L，脯氨酸120mg/L。a-萘乙酸2.2mg。蔗糖10.200mg/L。活性炭500mg/L。瓊脂3800mg/L。磁化水0.7升。

(2)將無機鹽各養分分別用20ml磁化水稀釋，將維生素類合并放入50ml無菌水中稀釋，將氨基酸全部放入50ml無菌水中稀釋，將生長素放入10ml無菌水中稀釋。然后將無機鹽類各分別注入燒瓶中0.7升磁化水中，邊加入邊攪拌，在將蔗糖、固化劑、活性炭放內、進入高壓滅菌30分鐘，降溫后取出，在將維生素溶液、氨基酸溶液、生長素溶液分別放入攪勻后，冷凝。

3.離體材料誘導及形成層分離培養

(1)將滅菌的番茄果實用接種刀切成八段，將最外層薄皮去掉，去掉內心，，將外皮的內皮層取出放進固態培養基中，在受控暗室內培養26天，培養溫度25±℃。

(2)將形成層細胞系用接種鏟輕輕將其移入另一同樣培養基燒瓶內，在放大培養20天。

(3)然后將其放大培養的細胞系群體移入液態培養基中，在暗室內用搖床旋轉培養，在160rpm、25±℃環境中培養，傳代時間設定為20天。

4.優選液態培養基的制備方法

按表1固態培養基的制備方法制作：

硫酸鉀995mg/L，磷酸氫鉀160mg/L，硫酸鎂185mg/L，硫酸鋅9mg/L，硫酸錳22mg/L，硫酸銅0.25mg/L，氯化鈣70mg/L，硝酸鈣480mg/L，鉬酸鈉0.26mg/L，硼酸6.5mg/L，硝酸胺420mg/L，乙二胺四乙酸鐵鈉鹽38mg/L，肌醇230mg/L，硫胺素22mg/L，煙酸2mg/L，吡哆醇2.5mg/L，L-抗壞血酸65mg/L，檸檬酸72mg/L，L-天冬氨酸140mg/L，L-精氨酸180mg/L，甘氨酸80mg/L，脯氨酸120mg/L，a-萘乙酸2.2mg/L。蔗糖31000mg/L。麥飯石顆粒60000mg/L，鍺石顆粒60000mg/L，硒礦石顆粒主90000mg/L。磁化水0.7升。

5.生物反應器內放大培養

將燒瓶內懸浮培養20天的細胞群移入20升的生物反應器內放大培養，培養基用優選液態培養基培養10天后，在向內注入蔗糖10g和甲基茱莉酮酸酯5mg、無菌磁化水0.5升的混合液，在繼續培養10天。

6.細胞系培養物的提取分離方法

(1)將培養液用1um過濾器過濾，去掉培養液，將截留的粘膠狀細胞系培養物取出，放入零下30度的冰箱內預凍3小時后，在放入液氮罐內超低溫速凍2小時，取出解凍30分鐘后，放入冰箱內預凍和液氮罐內速凍，依次2遍。

(2)將冷凍2次的細胞系黏液質取出，在室溫下維持10分鐘后，高速粉碎成60目凍粉，之后放入75％的3000ml乙醇液中間接加溫26℃中低溫下用旋轉式真空蒸發器濃縮，同時收集乙醇。

(3)將濃縮物放進低溫冷凍真空干燥機內，真空冷凍干燥，待含水分低于3％以下時取出，高速粉碎100目，裝入鋁泊袋內真空封口，即成為番茄植物干細胞乙醇提取物。

7.番茄植物干細胞口服液，飲料和白酒的制備方法

(1)番茄植物干細胞粉1g，蟲草多糖(含量為)3g，枸杞子多糖(含量40％)6g，葛根黃酮(含量為40％)1g，超氧化物歧化酶(SOD)0.1g，蜂膠65ml，L-抗壞血酸0.05g，苯甲酸鈉0.02g，磁化水30ml。

將上述除蜂膠外，全部放入30ml磁化水中，進行超聲粉碎混溶液中的細胞質20分鐘，按常規法制成100ml的口服液劑型，每支10ml。

(2)飲料：

番茄植物干細胞粉0.05g，枸杞子多糖(含量40％)0.3g，檸檬酸0.2g，L-抗壞血酸0.01g，苯甲酸鈉0.01g，磁化水380ml。

將上述各物質放入380ml磁化水中，攪拌溶解后，放入40HZ的超聲波清洗機內，超聲粉碎細胞質20分鐘，然后按常規法制成380ml裝的易拉罐劑型。

(3)番茄植物干細胞酒：

番茄干細胞粉1g，枸杞子多糖(含量40％)5g，優質白酒38°/500ml。

將干細胞粉，枸杞子多糖放入白酒攪拌溶解后，在放入40HZ超聲波清洗機內超聲粉碎乙醇混合物細胞質20分鐘，按常規法過濾3um，制成500ml或不同劑量裝的酒瓶內。