[發明專利]兩親性α螺旋自組裝肽及其應用

有效

• 申請號: 201310265579.X
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN104250288B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: 林章凜;周碧紅;邢磊;趙青
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K19/00;C12N15/11;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C12P21/00
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司11376
• 代理人: 程大軍,欒星明

1.一種多肽，其由衍生自SEQ ID NO:1的氨基酸序列組成，所述氨基酸序列與SEQ ID NO:1相比含有K4E/E1K雙突變，或含有K4E/E1K以及選自K4E/E8K、K9E/E12K、K15E/E12K和K13E/E16K的一或多種雙突變，其中當所述多肽與目的蛋白形成的融合蛋白在宿主細胞中表達時，所述融合蛋白能夠在所述宿主細胞內形成活性聚集體。

2.權利要求1的多肽，其由選自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20的氨基酸序列組成。

3.權利要求1或2的多肽，其中當所述多肽與目的蛋白形成的融合蛋白在宿主細胞中表達時，所述融合蛋白的蛋白產量與由SEQ ID NO:1的多肽與所述目的蛋白形成的融合蛋白的蛋白產量相比是增加的。

4.分離的多核苷酸，其編碼權利要求1-3任一項的多肽。

5.融合蛋白，其包含目的蛋白和權利要求1-3任一項的多肽。

6.權利要求5的融合蛋白，其中所述目的蛋白和所述多肽通過接頭相連。

7.權利要求6的融合蛋白，其中所述接頭包含SEQ ID NO:40的序列。

8.權利要求6的融合蛋白，其中所述接頭包含切割位點。

9.權利要求8的融合蛋白，其中所述切割位點選自化學切割位點、酶法切割位點和自切割位點。

10.權利要求9的融合蛋白，其中自切割位點為內含肽。

11.權利要求10的融合蛋白，其中所述內含肽的序列示于SEQ ID NO:41。

12.分離的多核苷酸，其包含編碼權利要求5-11中任一項的融合蛋白的核苷酸序列。

13.表達構建體，其包含權利要求12的多核苷酸。

14.宿主細胞，其包含權利要求12的多核苷酸或以權利要求13的表達構建體轉化，其中所述宿主細胞能夠表達所述融合蛋白。

15.產生和純化目的蛋白的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)培養權利要求14的宿主細胞，從而表達所述融合蛋白；和

(b)裂解所述宿主細胞，然后去除細胞裂解物的可溶部分，回收不溶部分。

16.權利要求15的方法，其中所述融合蛋白中的所述目的蛋白和所述多肽通過含有切割位點的接頭相連，所述方法還包括以下步驟：

(c)通過切割所述切割位點從步驟(b)獲得的不溶部分釋放可溶的目的蛋白；

(d)去除步驟(c)中的不溶部分，回收含有所述目的蛋白的可溶部分。