[發明專利]耐久腸球菌及其產生的可抑制李斯特菌的細菌素

有效

• 申請號: 201310265229.3
• 申請日: 2013-06-27
• 公開（公告）號: CN103305445A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 都立輝;鞠興榮;袁建;何榮;王立峰;宋偉;劉琴
• 申請（專利權）人: 南京財經大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C07K14/315;C12P21/02;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C12R1/46
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 張立榮

技術領域

本發明涉及微生物領域，中一株耐久腸球菌及其所產的可抑制李斯特菌的細菌素。

背景技術

細菌素是一類由核糖體產生的具有抑菌活性的蛋白質或多肽，在革蘭氏陽性和陰性菌中廣泛存在，其對目標細菌的抑制具有低濃度和高效性的特點。尤其自乳酸鏈球菌素Nisin獲得首次商業應用以來，人們對細菌素的研究更加關注。由于乳酸菌細菌素的生物安全性地位，在對化學防腐劑的安全隱患越來越重視的今天，細菌素作為生物防腐劑的應用符合了消費者對于安全、健康和天然的要求。

李斯特菌病是一種由食物污染單核細胞增生性李斯特菌（以下簡稱李斯特菌）引發的高病死率的腸道傳染病。歐美國家以軟乳酪、未經巴氏消毒的奶產品和熟食等為高危食物和主要傳播媒介，近年來也擴展到由污染的豆芽、卷心菜和香瓜導致的爆發病例。鑒于李斯特菌感染是危害公共食品安全的重要隱患，歐美國家均專門成立疾控專家組、建立監測網，加以重點防控。WHO也已將其列為20世紀90年代食品中四大致病菌之一。我國雖未有爆發性流行案例，但食品受到單增李斯特菌污染的報告屢見不鮮。隨著消費者飲食結構的改善，肉類和乳制品在膳食結構中的占比提升，李斯特菌中毒的危險越來越大，由食源性李斯特菌引起的潛在公共食品安全問題也愈發引起人們的普遍關注。

傳統的李斯特菌控制方法主要是通過接種發酵劑、控制溫度、水活度和pH值等常規物理化學條件來控制李斯特菌生長。近年來也有學者進行超高壓殺菌技術在控制李斯特菌方面的研究，但由于這一技術對設備的要求較高，在工業上推廣的難度較大。

如果能夠采用生物源細菌素抑制食品中李斯特菌的生長，避免化學防腐劑的使用，能夠符合廣大消費者對安全、健康、綠色的要求，具有較強的市場接受度。利用細菌素抑制李斯特菌的操作工藝簡單，無需企業增加投入購置新的儀器設備，利于在企業中推廣普及，因此具有較好的產業化前景，對于促進食品質量安全，保障廣大消費者的身體健康具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一株耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株，該菌株能夠產生可抑制李斯特菌的細菌素。

本發明的另一目的是提供上述菌株產生的可抑制李斯特菌的細菌素，該細菌素的抑菌譜較窄，只對腸球菌和李斯特菌有抑菌作用，對熱和pH穩定，由于耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株分離自發酵乳制品，所以作為食品專用抑菌劑非常安全。

本發明的再一目的是提供上述細菌素的制備方法，該方法簡單，純化效率高，安全。

本發明的目的采用如下技術方案實現。

耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株，其保藏登記號為：CGMCC?No.7236。

一種所述耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株產生的可抑制李斯特菌的細菌素。

所述細菌素的分子量為4900-5000Da。

所述細菌素的制備方法，發酵培養耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株，獲得發酵液，純化后得到所述細菌素。

所述耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株的發酵培養基含有：2-25g/L碳源，15-20g/L氮源，5-20g/L無機鹽，pH5-8。

所述發酵培養基還含有0.8-1.5mL/L表面活性劑；所述發酵培養基還含有0.1-3g/L維生素。

所述碳源為葡萄糖、乳糖、干酪乳清和糖蜜中的一種或兩種以上；所述氮源為蛋白胨、牛肉膏粉、酵母浸粉、酪蛋白胨、大豆蛋白胨中的一種或兩種以上，所述無機鹽為磷酸氫二鉀、乙酸鈉、檸檬酸氫二銨、檸檬酸三銨、硫酸鎂、硫酸錳、氯化鈉、β-甘油磷酸鈉中的一種或兩種以上，所述表面活性劑為吐溫-80、吐溫-20中的一種或兩種以上；所述維生素為維生素C、維生素D中的一種或兩種以上。

所述發酵培養基含有：18.0g/L葡萄糖，9.0g/L蛋白胨，6.0g/L牛肉膏粉，4.5g/L酵母浸粉，1.0mL/L吐溫-80，2.0g/L磷酸氫二鉀，5.0g/L乙酸鈉，2.0g/L檸檬酸三銨，0.2g/L硫酸鎂，0.06g/L硫酸錳，pH值為6.5。

所述耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株的發酵培養方法為：將耐久腸球菌（Enterococcus?durans）NJ株接種至所述發酵培養基，在36-39℃條件下發酵培養16-36h，得到發酵液。

所述發酵液的純化方法為：（1）將發酵液離心取上清，用大孔吸附樹脂吸附，收集吸附后的大孔吸附樹脂，解吸附后得到細菌素粗品；