[發明專利]一種高純度替考拉寧的分離純化方法

有效

• 申請號: 201310264441.8
• 申請日: 2013-06-27
• 公開（公告）號: CN103275192A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 仲偉潭;郭月玲;魏增輝;常亮;王崔巖;李敏娜;張雪霞;周站云;倪慧敏;梁冬;王力群;孟亞娟
• 申請（專利權）人: 華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/36;C07K1/16;C07K1/30
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

技術領域

本發明屬于制藥工程領域，具體地說，涉及一種微生物發酵所得替考拉寧的分離純化方法。

背景技術

替考拉寧（Teicoplanin）是游動放線菌（Actinoplanes?teichomyceticus）發酵產生的一種抗生素，其對革蘭陽性需氧菌和厭氧菌具有較強的抗菌活性，是目前臨床上為數不多的對多重耐藥性金葡菌和腸球菌仍有抗菌活性的藥物之一。

替考拉寧的分子量約為1900，是由結構十分相近的5個主要活性組分A_2-1、A_2-2、A_2-3、A_2-4、A_2-5，以及另外一個活性組分A_3-1組成。其中，前5個活性組分的總和簡稱A₂組，另一個活性組分稱為A₃組。替考拉寧分子結構通式見式（1），其中，各活性組分取代基結構見表1。

表1

目前，制藥領域遵循的標準中，《歐洲藥典》（EP）對替考拉寧中A2組中各組分的比例有明確要求。臨床研究表明，符合該比例要求的替考拉寧更加安全有效。現有替考拉寧的制備技術，通常是將生物發酵液經大孔樹脂吸附濃縮后，結晶得到替考拉寧粗品，再通過純化處理得到成品。然而現有的純化處理方法通常難以獲得符合EP標準的替考拉寧產品。中國專利申請201210221636.X公開了一種利用納米聚合物微球制備替考拉寧精粉的方法，該方法部分實現了產品中單組份的含量可控。然而，由于納米聚合物微球生產成本較高，該方法難以大規模推廣，不適合工業化生產。

發明內容

本發明的目的是提供一種操作簡便、成本低廉、適合工業化生產的替考拉寧的分離純化方法，該方法所得產品純度高、產品質量符合EP標準。

為實現本發明目的，本發明提供了下述替考拉寧的分離純化方法，其步驟如下：

a、將替考拉寧粗品用純化水溶解至替考拉寧濃度為5000-20000ug/ml，調節pH至7-9，通入裝填有三氧化二鋁的色譜柱進行上樣吸附，然后水洗至流出液呈無色，再采用體積比濃度為5-30%的低元醇水溶液進行醇洗，然后水洗至流出液呈無色，再采用體積比濃度為40-90%的低元醇水溶液進行洗脫，收集洗脫流出液；

b、將洗脫流出液納濾濃縮至替考拉寧濃度為5-20萬u/mL，得到濃縮液；

c、將濃縮液用2mol/L氫氧化鈉水溶液調節pH至7.2-8.0，向其中加入脫色介質，使脫色介質的質量體積比濃度達到2-5%，攪拌30-120min，過濾得到脫色液；

d、脫色液經微孔濾膜過濾后，得到精濾液；

e、在攪拌狀態下，向精濾液中加入低元醇，溶析結晶，抽濾，所得固體經真空加熱干燥得到替考拉寧精粉。

本發明步驟a所述裝填有三氧化二鋁的色譜柱，其中三氧化二鋁的粒度最好為200～300目；所述低元醇為甲醇、乙醇、異丙醇中的任意一種，所述收集洗脫流出液，其具體操作方法是：測定洗脫流出液中A₂組各組分及雜質濃度，在A_2-1濃度達到峰值之前，當雜質占總溶質的質量分數＜15%時，開始收集，在A_2-5濃度達到峰值之后，當雜質占總溶質的質量分數＞2%時，停止收集。該部分流出液外觀呈無色或接近無色。

本發明步驟b所述納濾濃縮，最好采用截留分子量為100-800Da的有機納濾膜。

本發明步驟c所述脫色介質可以是針用活性炭、糖用活性炭中的任意一種或兩種的混合物，優選針用活性炭與糖用活性炭的混合物。

本發明步驟d所述微孔濾膜最好為F型聚偏氟乙烯微孔濾膜，其孔徑為0.22微米或0.45微米。

本發明步驟e所述低元醇為甲醇、乙醇、異丙醇中的任意一種，低元醇加入量最好為精濾液體積的3-15倍。

本發明步驟a所述上樣吸附，流速最好為0.3-0.6BV/h，以流出液中替考拉寧的濃度大于100u/ml為止；所述醇洗，流速最好為1-2BV/h，以流出液達到3-4BV為止；所述洗脫，流速最好為0.3-0.6BV/h。