[發明專利]一種新的轉基因米曲霉檢測試劑盒及其檢測方法有效
| 申請號： | 201310263785.7 | 申請日： | 2013-06-28 |
| 公開（公告）號： | CN103497992A | 公開（公告）日： | 2014-01-08 |
| 發明（設計）人： | 張裕君;趙衛東;劉國紅;賀艷;鄭文杰 | 申請（專利權）人： | 天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 300461 天津*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 轉基因 曲霉 檢測 試劑盒 及其 方法 | ||
1.兩套用于轉基因米曲霉檢測的特異性引物和探針，其特征在于，序列為：?
上游引物1：PyrG-F-bio：5’biotin-AGCGCACGCGCTAGCCGT-3’?
下游引物1：PyrG-R：5’-GTGGGTCCTGCTACCTTTCC-3’?
探針1：PyrG-P-fitc：5’fitc-CTTGGAACGCATGAGTCTA-3’?
上游引物2：Np1-F-bio：5’biotin--GTAACCCAAGAGAATGCC-3’?
下游引物2：Np1-R：5’-AGTACCAGAGAAGCTCCA-3’?
探針2：Np1-P-fitc：5’fitc-AGACTCCTGCAATATCCGA-3’。?
2.一種用于檢測轉基因米曲霉的試劑盒其特征在于，包括如下成分：?
(1)陽性對照轉基因米曲霉DNA模板和陰性對照野生型米曲霉DNA模板?
(2)轉基因米曲霉PyrG、Np1上下游特異引物和探針?
上游引物1：PyrG-F-bio：5’biotin-AGCGCACGCGCTAGCCGT-3’?
下游引物1：PyrG-R：5’-GTGGGTCCTGCTACCTTTCC-3’?
探針1：PyrG-P-fitc：5’fitc-CTTGGAACGCATGAGTCTA-3’?
上游引物2：Np1-F-bio：5’biotin--GTAACCCAAGAGAATGCC-3’?
下游引物2：Np1-R：5’-AGTACCAGAGAAGCTCCA-3’?
探針2：Np1-P-fitc：5’fitc-AGACTCCTGCAATATCCGA-3’?
(3)10×ExTaq?PCR?Buffer，ddH2O，2.5mM?dNTP，5U/μlExTaq酶?
(4)生物素(biotin)、熒光素(fitc)抗原標記的薄膜層析試紙條。?
3.一種轉基因米曲霉的快速檢測方法，包括如下步驟：?
(1)PCR反應體系：?
PCR反應條件：94℃預變性1min，94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，30個循環，72℃延伸5min。?
(2)探針雜交：擴增結束后，加入探針(10μmol/L)1μl，94℃變性30s，55℃退火30s。?
(3)判定結果：用PyrG、Np1兩套特異引物探針進行擴增、雜交，PCR產物用試紙條檢測，兩套引物、探針控制線正常，檢測線都呈現陽性時，則說明該樣品含有轉基因米曲霉，若有一套或兩套引物、探針試紙條檢測結果顯示為陰性，則判定樣品中不含有轉基因米曲霉。?
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