[發明專利]卡介菌復合多糖及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201310262024.X
• 申請日: 2013-06-27
• 公開（公告）號: CN103305567A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 高戈;高梓博;高潔生
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00;A61K31/715;A61K45/00;A61P37/02;A61P11/00;A61P11/06;A61P37/08;A61P31/00;A61P35/00;C12R1/32
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種卡介菌復合多糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

???（1）將含有卡介菌標準菌株的傳代培養物繼續接種于蘇通培養基進行擴展培養至生長成乳白色至暗橙色菌膜；

???（2）復合多糖粗提：將上述培養物經煮沸提取，離心去沉淀，用極性有機溶劑在2-6℃沉淀復合多糖，獲得粗制復合多糖；

???（3）復合多糖精制：將上述粗制復合多糖經陰離子交換柱及超濾處理后，冷凍干燥獲得精制復合多糖，即卡介菌復合多糖。

2.根據權利要求1所述的卡介菌復合多糖的用途，其特征在于，步驟（1）具體包括以下步驟：

?1）制備蘇通液體培養基：將天門冬素?4.0g、MgSO₄.7H₂O??0.5g、枸櫞酸?2.0g、枸櫞酸鐵胺?0.05g?、K₂HPO₄?0.5g、丙三醇?6ml溶于800?ml蒸餾水中，待溶解后加蒸餾水至1000ml，以氨水調PH至7.2，再過濾后分裝100?ml錐形瓶，102.9KPa高壓滅菌20分鐘，待冷后作無菌試驗，置4℃冰箱保存；

2）菌種的擴大保存：接種卡介菌標準菌株至制備好的蘇通液體培養基，37℃恒溫培養箱中靜態培養14-28天，待菌生長濃密至生長成乳白色至暗橙色菌膜，置4℃備用；

3）液體培養：接種卡介菌標準菌株至制備好的蘇通液體培養基，37℃恒溫培養箱中靜態培養14-28天，待菌生長濃密后，離心去沉淀。

3.根據權利要求1所述的卡介菌復合多糖的用途，其特征在于，卡介菌標準菌株的保存與鑒定：卡介菌丹麥株接種用羅氏雞蛋斜面培養基上培養保存；增菌接種前，先經蘇通培養基傳代培養；傳代培養后，對細菌生長情況進行檢定，并經耐酸染色和革蘭染色進行形態學鑒定；將鑒定合格的傳代培養物繼續接種于蘇通培養基進行擴增培養4周；由于本菌為表面生長，在蘇通液體培養基表面生長成乳白至暗橙色菌膜。

4.根據權利要求1所述的卡介菌復合多糖的用途，其特征在于，步驟（2）具體步驟為：將卡介菌蘇通液體培養基增菌培養物加入25～35倍重量的去離子水，煮沸回流2小時，離心并收集提取液；向培養物中再加水煮沸回流1小時，離心，收集提取液；合并兩次提取液，繼續煮沸蒸發濃縮至溶液總糖含量達2%，加入2倍體積95%乙醇，離心，收集沉淀，再用95%乙醇清洗沉淀，離心，4℃收集沉淀，晾干，獲得粗制復合多糖。

5.一種如權利要求1-4任一所述的卡介菌復合多糖的制備方法制備的卡介菌復合多糖，其特征在于，包括阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，卡介菌復合多糖的分子量范圍為2?000～36?000道爾頓。

6.一種如權利要求5所述的卡介菌復合多糖的用途，其特征在于，將卡介菌復合多糖制成脂肪注射液、片劑、丸劑、膠囊劑、溶液、懸浮劑、微乳劑和脂肪乳劑中任意一種形式的藥物組合物；所述藥物組合物含有賦型劑、載體或稀釋劑。

7.根據權利要求6所述的卡介菌復合多糖的用途，其特征在于，所述藥物組合物的給藥途徑為口服、含服、腔道灌注、經皮、靜脈和肌肉注射中任意一種。

8.根據權利要求6所述的卡介菌復合多糖的用途，其特征在于，所述卡介菌復合多糖的藥物組合物單獨使用；或者結合抗腫瘤藥物使用。

9.根據權利要求8所述的卡介菌復合多糖的用途，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物包括環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、氟鐵龍、安曲希、絲裂霉素、阿霉素、表阿霉素、正定霉素、長春新堿、喜樹堿、順鉑、樂沙定、辛樂爾和紫杉醇。