[發明專利]一種阿加曲班注射液含量測定方法

無效

• 申請號: 201310259361.3
• 申請日: 2013-06-21
• 公開（公告）號: CN104237430A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 周革文;王秋成
• 申請（專利權）人: 深圳市泛谷醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種阿加曲班注射液含量測定方法，屬于醫藥技術領域。?

背景技術

阿加曲班是一種合成的單價小分子直接凝血酶抑制劑，它可選擇性地與凝血酶的催化活性位點(絲氨酸-組氨酸-精氨酸)進行可逆性地結合，從而發揮競爭性的抑制作用。與肝素和其他直接凝血酶抑制劑不同的是阿加曲班可抑制血凝塊中的凝血酶。阿加曲班的抗血栓作用不需要輔助因子抗凝血酶III。阿加曲班通過抑制凝血酶催化或誘導的反應，包括血纖維蛋白的形成，凝血因子V、VIII和XIII的活化，蛋白酶C的活化，及血小板聚集發揮其抗凝血作用。其作用特點為：①直接滅活凝血酶(因子II?a)的活性，對凝血酶的產生沒有直接作用，其作用不依賴于抗凝血酶；②不但滅活液相凝血酶，還能夠滅活與纖維蛋白血栓結合了的凝血酶；③阻斷凝血瀑布的正反饋，間接抑制凝血酶的產生；④治療劑量下對血小板功能無影響，不導致血小板減少癥；⑤具有良好的劑量-反應關系，效果和安全性可以預測；⑥與活化部分凝血活酶時間(APTT)或者活化凝血時間(ACT)相關性良好。?

在藥品生產、貯存和使用過程中，需要對產品質量進行檢驗以確保符合藥用要求，而要保證藥品療效最為關鍵的是含量一定要達到要求。?

發明內容

本發明提供一種阿加曲班注射液含量測定方法，采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以緩沖液(取冰醋酸1ml，稀釋至400ml，用氨試液或氨水調pH值至6.0)-甲醇混合液為流動相；柱溫為45℃；檢測波長為259nm，流速為1ml/min；精密移取阿加曲班注射液5ml，置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取阿加曲班對照品約12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。?

與標準JX20090312、標準YBH11152005及JP15增補版中阿加曲班含量測定相比，本發明提供的含量測定方法能將主峰與所有雜質峰分離檢測，尤其是主成分兩峰分離度可達1左右，避免了其他幾種方法由于主峰重合程度不同造成面積重視性差而帶來的系統誤差，同時各破壞樣品降解產物、空白輔料、空白溶劑(包括酸堿降解空白溶劑)對本含量測定方法無干擾。綜上所述，本方法專屬性強，重現性好，可作為本品的含量測定方法。?

本發明提供的含量測定方法操作步驟如下：?

照高效液相色譜法測定(中國藥典2010年版二部附錄V?D)測定。?

色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以緩沖液(取冰醋酸1ml，稀釋至400ml，用氨試液或氨水調pH值至6.0)-甲醇(42∶58)為流動相，柱溫45℃，檢測波長為259nm，流速?為1ml/min。精密稱取雜質A和阿加曲班對照品各5mg，置25ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為系統適用性測試液，精密移取2ml，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為系統適用性測試液，精密量取10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質A的第二個色譜峰與阿加曲班第一個色譜峰的分離度應不小于1.2。?

測定法精密量取本品5ml，置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取阿加曲班對照品約12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。?

含量測定方法驗證研究?

1、線性研究?

精密稱取阿加曲班對照品50.40mg，置50ml量瓶中，加25ml甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml分別置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為線性標準溶液。?

精密量取線性標準溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積對濃度作線性回歸，并繪制相應的線性關系圖，結果見表1。?

阿加曲班在0.0402～0.1608mg/ml范圍內呈線性，線性方程為y＝111.01x-0.0724，相關系數為0.9999。?

表1含量測定方法學線性試驗結果?