[發明專利]一種抗腫瘤靶向復合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310256984.5
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN103288968A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 郭占云;王曉敏;何勝祥
• 申請（專利權）人: 上海同科生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/16;A61P35/00
• 代理公司: 北京萬科園知識產權代理有限責任公司 11230
• 代理人: 劉俊玲;張亞軍

技術領域

本發明涉及生物化學及基因工程技術相關的生物制藥領域，具體的說，本發明涉及一種抗腫瘤靶向復合物，及其制備方法和該靶向復合物在腫瘤治療中的應用。?

背景技術

據衛生部統計數據，惡性腫瘤已經成為我國第一位致死疾病。惡性腫瘤的常規療法，包括手術、放療、化療，都存在一定的局限性。例如傳統抗腫瘤藥物通常有較大的副作用，在殺死癌細胞的同時也對正常細胞造成很大的損傷。靶向藥物利用對腫瘤細胞特異的靶向分子，將抗腫瘤藥物專一性導向腫瘤細胞，因此對腫瘤細胞具有更高的殺傷效率，而對正常細胞的毒副作用則更低，是以后抗腫瘤藥物研究的重點。?

蛙卵核糖核酸酶（英文名onconase，簡稱Onc）是1988年從一種林蛙（Rana?pipiens）卵母細胞中分離出來的一種核糖核酸酶（RNase)，只有104個氨基酸殘基。Onc最顯著的特點是它具有細胞毒性，可以殺死癌細胞，而且免疫原性低。2007年初，美國FDA已經批準單獨的Onc作為孤兒藥物用于惡性胸膜間皮瘤的臨床治療。?

蝎氯毒素（英文名chlorotoxin，簡稱CTX）是1993年從非洲金蝎毒液中分離出來的一個多肽毒素，只有36個氨基酸殘基。CTX可以通過惡性神經膠質瘤細胞表面特異性高表達的基質金屬蛋白酶2及Annexin-2結合到腫瘤細胞上。美國FDA已經批準放射性碘131標記的CTX作為孤兒藥物用于惡性膠質瘤的臨床治療。惡性膠質瘤是中樞神經系統最常見的一種惡性腫瘤，也是目前最難治療的惡性腫瘤之一。?

現有技術中，單獨使用Onc或CTX進行抗腫瘤治療的效果具有很大局限性。例如，CTX雖然具有腫瘤靶向性，但其本身不足以殺死腫瘤細胞；Onc雖然能夠殺死腫瘤細胞，但是也能殺死正常細胞，對腫瘤細胞沒有選擇性殺傷作用。即便是將Onc與CTX混合使用，也不達到良好的抗腫瘤效果。?

發明內容

本發明的目的在于：提供一種抗腫瘤靶向復合物，具有比現有的抗腫瘤生物制劑Onc、CTX中任意一種或其混合物更高的抗腫瘤療效。?

本發明的另一個目的是提供一種制備上述抗腫瘤靶向復合物的制備方法。?

本發明的再一個目的是提供所述抗腫瘤靶向復合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。?

本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的：?

提供一種抗腫瘤靶向復合物，它是蝎氯毒素（CTX）和蛙卵核糖核酸酶（Onc）通過二硫鍵交聯得到的化學交聯復合物，我們將其記作“CTX-Onc”。?

所述的CTX是現有物質，可以基于大腸桿菌重組表達及體外酶促成熟策略制備得到成熟的CTX，化學合成的6×His-CTX的核苷酸序列見Seq?ID?NO.1，氨基酸序列見Seq?ID?NO.2。?

所述的Onc是現有物質，可以基于大腸桿菌重組表達及體外酶促成熟策略制備得到成熟的Onc，化學合成的6×His-Onc的核苷酸序列見Seq?ID?NO.3，氨基酸序列見Seq?ID?NO.4。?

本發明還提供制備所述的CTX和Onc化學交聯復合物(CTX-Onc)的方法，其步驟如下：?

1）重組制備的成熟CTX與氨基特異性修飾劑SPDP在磷酸緩沖液中（50mmol/l磷酸鈉,150mmol/l?NaCl,pH8.0）按1:1的摩爾比于室溫反應1h，然后用TFA調至pH3.0，用HPLC純化，收集修飾的CTX并經質譜鑒定；?

2）重組制備的成熟Onc和氨基特異性修飾劑2-Iminothiolane在磷酸緩沖液中（50mmol/l磷酸鈉,150mmol/l?NaCl,2.4mmol/l巰基乙醇,pH8.0）按1:20的摩爾比在室溫反應1h，然后用乙酸調至pH3.0，用Sephadex?G-25分子篩去除過量修飾劑；?

3）將步驟1）修飾的CTX和步驟2）修飾的Onc按1:1的摩爾比在磷酸緩沖液中（50mmol/l磷酸鈉,150mmol/l?NaCl,pH8.0）中于室溫反應0.5h，然后用乙酸調至pH3.0，用?Sephadex?G-25分子篩去除鹽，用10%乙酸洗脫，得到所述的CTX和Onc化學交聯復合物，即所述的抗腫瘤靶向復合物。?

本發明還提供所述抗腫瘤靶向復合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。?