[發明專利]提取發酵床墊料細菌總DNA的方法

無效

• 申請號: 201310256759.1
• 申請日: 2013-06-26
• 公開（公告）號: CN103773755A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 李婧;顏培實
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種提取發酵床墊料細菌總DNA的方法，其特征如下：

1.提取發酵床墊料細菌總DNA之試劑盒改進方法，其特征在于：

將發酵床樣本置于盛有PBS溶液離心管中，離心后提取上清液，在新的離心管中加入0.5～2M0.3V/V的鹽酸硫胺素溶液，添加Genoise?Bacteria?DNA?Ectracetion?Kit?1號液和Protein?K，震蕩混勻，水浴后放于冰上冷卻至室溫，加入Genoise?Bacteria?DNA?Ectracetion?Kit?2號液，劇烈震蕩后將離心管放在冰袋上冷卻至室溫，室溫下離心，棄固形物取上清液，轉移到新的離心管中，重復離心步驟直至無固形物可見，在離心液中加入異丙醇，上下顛倒混勻，室溫下培養，離心，棄上清，向新的離心管中加入乙醇，上下顛倒數次以清洗DNA團塊，室溫下離心，棄上清，風干5min以內。加入Genoise?Bacteria?DNA?Ectracetion?Kit?L3號液，移液槍混勻，室溫下培養。最后Nanodrop2000紫外分光光度儀測定核酸濃度，蛋白污染和酚污染。

2.權利要求1所述方法提取發酵床墊料中細菌總DNA，并應用于PCR、Real-time?PCR、DGGE等后續分子生物技術。

3.根據權利要求1所述的鹽酸硫胺素溶液，最適合含量為1M。

4.提取發酵床墊料細菌總DNA之zoetendal改進方法，其特征在于：

將發酵床樣本放于盛有CTAB離心管中，震蕩混勻，離心后提取上清液，加0.3v/v0.5～2M鹽酸硫胺素溶液并放于冰上冷卻置室溫，離心后轉移上清，加入RNase，37℃水浴。加入氯仿：酚：異戊醇溶液，震蕩至溶液呈乳白色混濁狀態。離心后取上清液，重復離心步驟，直至全界面清晰無固形物，加入異丙醇，震蕩混勻，放置至室溫，離心后小心棄去上清液，加入乙醇后震蕩混勻，將白色液體輕輕彈起，離心后小心棄去上清液。加TE?buffer，震蕩，最后用Nanodrop2000測定核酸濃度，蛋白污染和酚污染。

5.權利要求4所述方法提取發酵床墊料中細菌總DNA，并應用于PCR、Real-time?PCR等后續技術。

6.根據權利要求4所述的鹽酸硫胺素溶液，最適合含量為0.5M。