[發明專利]一種熒光標記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應用

無效

• 申請號: 201310254778.0
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN103623418A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 蔣孟軍;吳鵬西;殷瑩;李小雯;謝平
• 申請（專利權）人: 蔣孟軍;吳鵬西;殷瑩;李小雯;謝平
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K49/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

熒光標記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應用，屬于熒光標記技術領域。本發明示蹤劑FITC-?IF7可用于檢測其進入不同腫瘤細胞的能力，在抗腫瘤藥物研制和光學成像等生物應用領域具有重要的作用。

背景技術

在生命科學及現代分子生物學領域里，研究和應用高靈敏度的非同位素檢測方法一直是各國學者共同努力的方向。熒光標記技術是指利用一些能發熒光的物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。該技術具有高靈敏度、高穩定性和高選擇性等特點。

糖模擬肽（carbohydrate?mimetic?peptide，CMP），是一短序列肽分子，能模擬生物大分子或細胞表面復雜的糖結構，常用于替代糖分子進行誘導免疫反應制備特異性抗體。CMP分子小，血漿清除快，在藥代動力學方面極具優勢，備受研究者青睞，現在也多用于篩選受體或抗體的特異性高親和力配體。如能篩選出一種與腫瘤新生血管特異性結合的CMP，將有較高應用前景。Shingo?Hatakeyama等在研究糖模擬肽的過程中，發現了一個名為IF7的七肽片段，能有效靶向腫瘤血管，而且基本不引起免疫反應。Anxa1是鈣磷脂結合蛋白Anx家族的成員之一，高表達于腫瘤新生血管，是EGFR的底物，可以特異性調節MAPK/ERK信號傳導通路，同時作為PLA2的抑制劑等參與信號轉導、細胞凋亡、鈣離子通道的形成等眾多生理過程，在腫瘤的形成及發展中起重要作用。結合Shingo?Hatakeyama等的研究，我們發展了以IF7為基礎，以Anxa1為靶點，熒光為標記的腫瘤靶向示蹤劑，檢測其進入不同腫瘤細胞的能力，這對研究抗腫瘤藥物和光學成像等生物應用領域具有重要的作用。

發明內容

本發明的目的是提供一種熒光標記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應用。用熒光基團標記IF7制備腫瘤靶向示蹤劑，并且檢測其進入腫瘤細胞的能力，在抗腫瘤藥物研制和光學成像等生物應用領域具有重要的作用。

本發明的技術方案：一種熒光標記的腫瘤靶向示蹤劑，該示蹤劑由異硫氰酸熒光素FITC與7肽IF7構成，記為FITC-?IF7；7肽IF7為異亮氨酸－苯丙氨酸－亮氨酸－亮氨酸－色氨酸－谷氨酰胺－精氨酸。

???FITC－IF7的結構式為

。

腫瘤靶向示蹤劑的制備

（1）IF7、FITC分別用DMSO溶解配制成10mg/mL溶液，再用0.5mol/L?的碳酸氫鈉緩沖溶液稀釋成1mg/mL溶液。

（2）取1mg/mL?的FITC（10μL）緩慢加入于1mg/mL?的IF7（100μL）溶液中，邊加邊輕輕晃動使其混合均勻，暗處4℃反應24?h。

（3）加入5mol/L的NH₄Cl至終濃度50mmol/L，4℃終止反應2?h。

腫瘤靶向示蹤劑的分離純化：

（1）制備型高效液相（HPLC）純化

FITC標記的IF7用制備型高效液相（HPLC）純化，Waters?XBridge，C-18色譜柱(150?mm?×19mm，5μm)，流動相A為純水（0.1%TFA），B為乙腈（0.1%TFA），流速20mL/min，進樣體積為1?mL，檢測波長218nm。

（2）梯度洗脫，條件為，收集16.51min的流出液。

表1　HPLC純化FITC－IF7洗脫條件