[發(fā)明專利]H7N9亞型禽流感病毒快速檢測引物組及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310254750.7
• 申請(qǐng)日: 2013-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN103320532A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金發(fā)光;魯曦;傅恩清;李王平;穆德廣;陳延偉;南巖東;潘蕾;孫瑞琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一組用于檢測H7N9亞型禽流感病毒的引物組，其包含以下引物：

(1)針對(duì)H7亞型進(jìn)行檢測的各引物如下：

外引物1：GAAGAAGCTCTGAGGCAA

外引物2：CTTAGTCATCTGCGGGAA

內(nèi)引物1：

TGCTCCATTAGTTCTTATTCCACTGATTCTCAGAGAATCAGGCG

內(nèi)引物2：

TGCATGTAGGAGATCAGGATCTGCATTATCTGTGTTTGACAGG；

(2)針對(duì)N9亞型進(jìn)行檢測的各引物如下：

外引物1：CTGGCCACTATCATCACC

外引物2：TGTGTTCTTAGTATGTTTCGG

內(nèi)引物1：GCCATCATGGCAACTAGTACTTGCCCACAGTGTACAACAGC

內(nèi)引物2：

TCAGGACCAAACAACAATGCAGTGTTAATTTCTGCAACAGGC。

2.權(quán)利要求1所述的引物組在檢測H7N9亞型禽流感病毒中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述的引物組在制備檢測H7N9亞型禽流感病毒的試劑盒中的用途。

4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于：試劑盒的使用方法如下：

(1)對(duì)被檢樣品的RNA提取：用常規(guī)法快速提取樣本RNA和反轉(zhuǎn)錄；

(2)按照以下配方配制反應(yīng)液：反應(yīng)體系為25μL：1-10mM的內(nèi)引物1和內(nèi)引物2、0.1-10mM的外引物1和外引物2、1-10mM的dNTPs、1-10mM的MgSO4、1-10M的甜菜堿、1-5μL粗提DNA、1-8U?BstDNA聚合酶、加蒸餾水至25μL，溫和混勻。

(3)進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)：在60-65℃保溫0.5至1.5小時(shí)進(jìn)行循環(huán)鏈置換反應(yīng)。

(4)分析判斷反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)果：在反應(yīng)產(chǎn)物中加入SYBR?Green?I熒光染料，混勻，靜置5min，反應(yīng)產(chǎn)物顯現(xiàn)綠色則為陽性，顯橙色則為陰性。