[發明專利]一種雙組份植物激素的同時測定方法

有效

• 申請號: 201310253926.7
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN103323607A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 混旭;陳壞成
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于化學發光技術領域，涉及一種雙組份植物激素同時測定的方法，具體涉及植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）雙組份的同時測定方法。?

背景技術

植物激素是一些對植物生命攸關的化學信號分子，在植物體內合成，并以極微量的濃度引發生理效應，影響和控制著植物的生長發育及其對環境的適應性。植物激素在植物體內的含量很低。近年來植物激素測定方法主要有：液相色譜-質譜法（盧巧梅,?張蘭,?陳天文,?盧明華,?陳國南.?液相色譜-串聯質譜分析鹽脅迫下植物激素的含量變化.?中國科學?B?輯:化學?2009,?39:?785）；氣相色譜-質譜法（Barkawi?L?S,?Tam?Y?Y,?Tillman?J?A,?Pederson?B,?Calio?J,?Al-Amier?H,?Emerick?M,?Normanly?J,?Cohen?J?D.?A?high-throughput?method?for?the?quantitative?analysis?of?indole-3-acetic?acid?and?other?auxins?from?plant?tissue.?Anal?Biochem,?2008,?372:?177）；免疫傳感器法（Xiao?L.?T,?Wang?R?Z.?Immunosensor?assay:?a?novel?method?to?analyze?phytohormones.?PGRSA?Quarterly.?2006,?33:51）和化學發光法（Hun?X,?Mei?Z?H,?Wang?Z?P,?He?Y?H.?Indole-3-acetic?acid?biosensor?based?on?G-rich?DNA?labeled?AuNPs?as?chemiluminescence?probe?coupling?the?DNA?signal?amplification.?Spectrochimica?Acta?Part?A,?2012,?95:114）等。?

但是，這些方法的各有其缺點，本發明利用金納米粒子和磁珠為載體，以?ABEI-BSAAuNPs為納米粒子標記物，實現了植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的雙組份測定，具有方法簡單、成本低、靈敏度高的優點。?

發明內容

本發明目的是提供一種同時測定雙組份植物激素的方法，利用金納米粒子和磁珠為載體，以ABEI-BSAAuNPs為納米粒子標記物，實現植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的雙組份同時測定。?

技術方案

一種雙組份植物激素同時測定的方法，植物激素為吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的雙組份，其特征在于用金納米粒子和氨基化磁珠為載體，以ABEI-BSAAuNPs為納米粒子標記物，實現植物激素吲哚乙酸（IAA）和赤霉素（GA）的雙組份同時測定，測定步驟如下：

（1）金納米粒子（AuNPs）的制備，制備、儲存金納米粒子溶液所用的玻璃容器（容量瓶，棕色廣口瓶，圓底燒瓶等）用王水（鹽酸硝酸比例為1:3）泡洗30?min（分鐘），然后用二次蒸餾水沖洗干凈，烘干備用；在250?mL圓底燒瓶中加入100?mL質量濃度0.01%的氯金酸（HAuCl₄），攪拌加熱至沸騰，然后快速加入1.8?mL質量濃度1%的檸檬酸三鈉（Na₃C₆H₅O₇），繼續加熱10?min，攪15?min，冷卻至室溫。轉移到棕色瓶中于陰涼處保存；

（2）anti-IAA抗體標記金納米粒子（AuNPs）的制備，取2?mL的樣品管，依次加入2?μL?500?mM（毫摩爾/升）的三（羥甲基）氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCl）（pH為8.2），6?μL?10?mM的磷酸三氯乙酯（TCEP），6?μL?10^-4?M的巰基乙胺，室溫放置30?min后加入1?mL?步驟（1）制備的AuNPs，室溫下反應12?h（小時），得到巰基乙胺修飾金納米粒子；取上述所得的巰基乙胺修飾金納米粒子分散在含5（wt）%戊二醛的磷酸緩沖溶液中，持續攪拌2?h，用磷酸緩沖溶液離心清洗3次，再將其在磷酸緩沖溶液中，加入含10?μg?anti-IAA抗體溶液，4?℃振動孵育12?h，得到anti-IAA抗體標記金納米粒子；