[發明專利]制備分子量可控的藥用右旋糖酐的方法

有效

• 申請號: 201310247228.6
• 申請日: 2013-06-21
• 公開（公告）號: CN103290080A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 張洪斌;曹妍妍;張宇琪;宋丹丹;胡雪芹
• 申請（專利權）人: 合肥工業大學
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18;C12P19/16;C12P19/08;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備分子量可控的藥用右旋糖酐的方法，其特征在于，包括以下步驟：在含蔗糖的發酵培養基中加入腸膜狀明串珠菌(Leuconstoc?mesenteroides)種子液進行發酵培養，從發酵液中分離高分子右旋糖酐，采用高酶活性的右旋糖酐酶催化降解高分子右旋糖酐為藥用右旋糖酐，從反應液中分離右旋糖酐，然后經過逐級醇沉得到特定分子量的藥用右旋糖酐。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，腸膜狀明串珠菌的發酵培養在24-26℃、pH值7.2～7.6下進行，發酵時間為20～24小時，所得高分子右旋糖酐經醇沉分離，分離后的高分子右旋糖酐經80-100℃糊化成均一溶液后加入右旋糖酐酶進行催化降解。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的發酵培養基和/或種子液包括蔗糖，蛋白胨以及磷酸氫二鈉。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的腸膜狀明串珠菌(Leuconstoc?mesenteroides)選自L.M-1226號菌。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，從所述的發酵液中分離高分子右旋糖酐的方法包括向發酵液中加入80-90％乙醇，使發酵液中乙醇的體積濃度為35％～38％，右旋糖酐沉淀后，再經80-90％乙醇捏洗至“老化”。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的高分子右旋糖酐用蒸餾水按照濕糖酐與醋酸緩沖溶液1∶1.8(w/V)配制成高分子右旋糖酐溶液。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的右旋糖酐酶優選使用從土壤中篩選出的棘孢青霉菌株發酵產生的右旋糖酐酶，該菌株的保藏號為CGMCC?No.4725。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的右旋糖酐酶水解反應液置于75-85℃保溫20-40min，隨后采用中速定性濾紙過濾上清；然后再將上述過濾后的上清液采用活性炭攪拌吸附，靜置，再利用中速定性濾紙去除雜質，清澈透明的濾液用于右旋糖酐分離醇沉。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，從所述的反應液中逐級分離右旋糖酐的方法包括采用4級劃分：向澄清無色的濾液中加入乙醇使乙醇體積濃度為38-40％時醇沉，將濾液置于38-42℃保溫20-24h，然后倒出上清液，取出一級沉淀右旋糖酐；向一級劃分后的上清液加入乙醇，使一級上清液中乙醇的體積濃度達到43％時醇沉，將醇沉好的溶液置于32-36℃保溫20-24h，然后倒出上清液，取出二級沉淀右旋糖酐；向二級劃分后的上清液中加入乙醇，使二級上清液中乙醇體積濃度達到47-49％時醇沉，將醇沉好的溶液置于38-42℃保溫10-14h，然后倒出上清液，取出二級沉淀右旋糖酐；向三級劃分后的上清液中乙醇，使三級上清液中乙醇體積濃度達到56-60％時醇沉，將醇沉好的溶液置于室溫靜置1-3h，然后倒出上清液，去除沉淀右旋糖酐。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，將分離得到的右旋糖酐產品分別置于真空干燥箱中干燥，去除產品中殘留的乙醇及水分，即得到相應的右旋糖酐產品。