[發(fā)明專利]α-半乳糖苷酶缺陷的治療有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310243356.3 | 申請日： | 2000-03-09 |
| 公開（公告）號： | CN103585621A | 公開（公告）日： | 2014-02-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | R·F·賽爾頓;M·布羅斯克;C·M·克諾施塔;D·A·瑞寇;M·D·維拉姆斯;T·J·舒特茲;P·F·達(dá)尼爾 | 申請（專利權(quán)）人： | 夏爾人類遺傳性治療公司 |
| 主分類號： | A61K38/47 | 分類號： | A61K38/47;C12N9/40;A61P3/00 |
| 代理公司： | 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038 | 代理人： | 劉曉東 |
| 地址： | 美國馬*** | 國省代碼： | 美國;US |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 半乳糖 缺陷 治療 | ||
1.含人α-Gal?A制劑的組合物，如SDS-PAGE或反相HPLC測量，純化至至少99.5％同質(zhì)性，其中所述制劑包含多種α-Gal?A糖形式且具有至少3.0x106單位/mg蛋白質(zhì)的比活性，而且其中所述制劑基本上不含植物凝血素。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述α-Gal?A糖形式的寡糖至少35％帶電荷。
3.權(quán)利要求1的組合物，如Z數(shù)目測量的，其中所述α-Gal?A糖形式的寡糖電荷超過150。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述α-Gal?A糖形式的總聚糖至少60％唾液酸化。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中所述制劑的循環(huán)半衰期延長。
6.用于生產(chǎn)含多種α-Gal?A糖形式的純化α-Gal?A制劑的方法，所述方法包括下列步驟：
a)在平衡緩沖液中于酸性pH使所述α-Gal?A糖形式結(jié)合陽離子交換樹脂，
b)用所述平衡緩沖液清洗所述樹脂以洗脫未結(jié)合的物質(zhì)，并
c)使用選自下組的洗脫溶液洗脫所述α-Gal?A糖形式：10－100mM的鹽溶液、pH4－5的緩沖液、及其組合，
其中所述α-Gal?A制劑純化至至少99.5％同質(zhì)性，且其中所述制劑基本上不含植物凝血素。
7.權(quán)利要求6的方法，還包括選自下組的純化步驟：層析聚焦層析法、金屬螯合物親和層析法、和免疫親和層析法。
8.含多種α-Gal?A糖形式的α-Gal?A制劑，純化至至少99.5％同質(zhì)性，由權(quán)利要求6的方法生產(chǎn)。
9.用于生產(chǎn)寡糖電荷增加的糖基化α-Gal?A制劑的方法，所述方法包括下列步驟：
a)將編碼GlcNac轉(zhuǎn)移酶III（GnT-III）的多核苷酸導(dǎo)入α-Gal?A生產(chǎn)細(xì)胞，或者通過同源重組導(dǎo)入調(diào)控序列以調(diào)控內(nèi)源GnT-III基因的表達(dá)；
b)在能夠表達(dá)α-Gal?A和GnT-III的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)所述α-Gal?A生產(chǎn)細(xì)胞；并
c)分離α-Gal?A，其中所述α-Gal?A制劑的寡糖電荷比不含所述多核苷酸的細(xì)胞產(chǎn)生的α-Gal?A多。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述α-Gal?A制劑的寡糖至少35％帶電荷。
11.權(quán)利要求9的方法，其中所述α-Gal?A制劑包含多種糖形式，所述糖形式的復(fù)合聚糖至少20％含2－4個唾液酸殘基。
12.權(quán)利要求9的方法，如Z數(shù)目測量的，其中所述α-Gal?A制劑的寡糖電荷超過150。
13.權(quán)利要求9的方法，其中所述制劑包含多種糖形式，所述糖形式平均至少25－50％磷酸化。
14.寡糖電荷增加、由權(quán)利要求9－13任一項(xiàng)的方法生產(chǎn)的糖基化α-Gal?A制劑。
15.用于生產(chǎn)寡糖電荷增加的糖基化α-Gal?A制劑的方法，所述方法包括下列步驟：
a)將編碼唾液?；D(zhuǎn)移酶的多核苷酸導(dǎo)入α-Gal?A生產(chǎn)細(xì)胞，或者通過同源重組導(dǎo)入調(diào)控序列以調(diào)控內(nèi)源唾液酰基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)；
b)在能夠表達(dá)α-Gal?A和唾液?；D(zhuǎn)移酶的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)所述α-Gal?A生產(chǎn)細(xì)胞；并
c)分離α-Gal?A，其中所述α-Gal?A制劑的寡糖電荷比不含所述多核苷酸的細(xì)胞產(chǎn)生的α-Gal?A多。
16.權(quán)利要求15的方法，還包括下列步驟：
d)通過分離或純化步驟（c）的制劑來選擇大小或電荷增加的α-Gal?A糖形式。
17.寡糖電荷增加、由權(quán)利要求15或16的方法生產(chǎn)的糖基化α-Gal?A制劑。
18.用于生產(chǎn)唾液酸化增加的糖基化α-Gal?A制劑的方法，所述方法包括使α-Gal?A生產(chǎn)細(xì)胞接觸銨濃度低于10mM的培養(yǎng)基的步驟。
19.權(quán)利要求18的方法，其中接觸步驟包括用新鮮培養(yǎng)基連續(xù)或間歇灌注所述α-Gal?A生產(chǎn)細(xì)胞以維持銨濃度低于10mM。
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