[發明專利]一種利拉魯肽的制備方法

無效

• 申請號: 201310243204.3
• 申請日: 2013-06-19
• 公開（公告）號: CN103288951A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 潘俊鋒;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

技術領域

本發明涉及多肽合成領域，特別涉及一種利拉魯肽的制備方法。

背景技術

隨著生活水平的提高和生活方式的改變，近年來，我國糖尿病的發病率有逐年增加的趨勢。糖尿病是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各種致病因子作用于機體，導致胰島功能減退、胰島素抵抗等，繼而引發體內糖、蛋白質、脂肪、水和電解質等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點，典型病例可出現多尿、多飲、多食、消瘦等表現，即“三多一少”癥狀，一旦控制不好會引發嚴重的并發癥，導致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。糖尿病分為妊娠期糖尿病、特異性糖尿病、I型糖尿病和II型糖尿病。其中，II型糖尿病又名非胰島素依賴型糖尿病，特點是人體自身能夠產生胰島素，但細胞無法對其作出反應，使胰島素的效果大打折扣。

II型糖尿病主要通過口服或皮下注射降糖藥治療。針對II型糖尿病的降糖藥種類很多，包括二甲雙胍、磺脲類藥物和胰高血糖樣肽-1（GLP-1）的受體激動素等，GLP-1的受體激動素是近年來研究的熱點。其中，利拉魯肽（liraglutide）是GLP-1的受體激動素之一，2010年1月25日，美國FDA批準由丹麥諾和諾德公司研發的利拉魯肽（商品名為Victoza）注射劑在美國上市，2011年3月4日，利拉魯肽獲得SFDA批準上市。利拉魯肽的化學表述為Arg³⁴Lys²⁶-[N-ε-(γ-Glu-(N-hexadecanoyl))]-GLP-1^7-37，分子式為C₁₇₂H₂₆₅N₄₃O₅₁，相對分子質量3751.2，CAS登記號為204656-20-2，分子式如式I所示，與天然GLP-1相比，藥效相當且作用時間更長。

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目前，諾和諾德公司主要是通過基因重組技術，利用酵母生產利拉魯肽；有報道利用固液合成法合成利拉魯肽，其中間體GLP-1(7-37)-OH均需要經過反相HPLC純化，再在液相條件下與Nα-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu反應，純化得到利拉魯肽；有報道利用一種固液法合成其類似物的方法，基本原理是采用固相法合成GLP-1(7-37)-OH，再在液相條件下用NMP和水溶解，加入堿（DIPEA），再加入Nα-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu，反應結束后加入甘氨酸終止反應，再經過RP-HPLC純化得到目標產物；還有報道利用一種全固相合成方法，采用2-CTC樹脂或王樹脂，按照利拉魯肽肽序逐個偶聯氨基酸，最后經過反向純化得到利拉魯肽，或者是采用5個片段偶聯的方法合成利拉魯肽。

由于利拉魯肽的肽序較長，其中含有15個疏水性氨基酸，而在Fmoc固相合成中，疏水性氨基酸的存在會導致肽鏈的β折疊，導致氨基酸偶聯效率低下，從而產生缺省肽（非目的肽），在純化過程中難以純化，導致利拉魯肽的收率偏低。另外，現有的合成方法合成利拉魯肽時，在脫除賴氨酸側鏈的步驟中用到了昂貴的鈀催化劑，使得合成成本偏高。因此，提供一種產品收率高、成本低廉的利拉魯肽制備方法具有重要的現實意義。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種利拉魯肽的制備方法。該方法制得的利拉魯肽中雜質少，易純化，可提高最終產品的收率。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種利拉魯肽的制備方法，包括如下步驟：

步驟A：取Gly與樹脂偶聯，得到Gly-樹脂；

步驟B：取Gly-樹脂經第一逐步偶聯，得到多肽片段-樹脂；

步驟C：取多肽片段-樹脂經側鏈修飾、第二逐步偶聯、裂解、純化、凍干，即得；

多肽片段-樹脂中多肽片段的序列如SEQ?ID?NO：1所示；

利拉魯肽的序列如SEQ?ID?NO：2所示；

側鏈修飾具體為：脫除多肽片段-樹脂中Lys側鏈的保護基，依次偶聯Fmoc-Glu-OtBu、棕櫚酰氯。

作為優選，步驟A中樹脂為CLEAR-Acid?Resin。

作為優選，樹脂的替代度為0.2～1.0mmol/g；

作為優選，Gly-樹脂的替代度為0.15～0.32mmol/g。

作為優選，從N端起，利拉魯肽第11位、第12位的氨基酸原料為Fmoc-Ser(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH。