[發(fā)明專利]醋酸胸腺五肽規(guī)模化制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310243202.4
• 申請日: 2013-06-19
• 公開（公告）號: CN103288923A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 趙忠衛(wèi);潘俊鋒;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/16;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市深佳知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及多肽制備領域，特別涉及醋酸胸腺五肽規(guī)模化制備方法。

背景技術(shù)

胸腺五肽是胸腺分泌物的一種，胸腺生成素Ⅱ的有效部分。胸腺生成素Ⅱ是從胸腺激素中分離出來的單一多肽化合物，由49個氨基酸組成，而其中由5個氨基酸組成的肽鏈片段，卻有著與胸腺生成素II相同的全部生理功能，所以就把這個五肽片段稱為胸腺五肽。

胸腺五肽由精氨酸、賴氨酸、天門冬氨酸、纈氨酸、酪氨酸五種氨基酸組成。其化學名稱為N-〔N-〔N-〔NL-精氨酰-L-賴氨酰〕-L-α-天冬氨酰〕-L-纈氨酰〕-L-酪氨酸。分子式：C₃₀H₄₉N₉O₉。分子量：679.77。

胸腺五肽的作用之一是誘導T細胞分化。它可選擇性地誘導Thy-1-的前胸腺細胞轉(zhuǎn)化為Thy-1+的T細胞。其T細胞分化作用由胞內(nèi)cAMP水平升高介導。胸腺五肽的另一基本作用是對成熟外周血T細胞的特異受體結(jié)合，使胞內(nèi)cAMP水平上升，從而誘發(fā)一系列胞內(nèi)反應，這也是它免疫調(diào)節(jié)功能的基礎。在正常機體狀態(tài)下胸腺五肽顯現(xiàn)免疫刺激作用，能顯著增高脾淋巴細胞的E玫瑰花結(jié)形成率及轉(zhuǎn)化率，對免疫應答的初次或再次反應的不同階段都有增強作用，能增多IgM類型和IgG或IgA類型的抗體形成細胞。胸腺五肽還可增強巨噬細胞的吞噬功能，增加多形核嗜中性白細胞的酶和吞噬功能，升高循環(huán)抗體含量，增強紅細胞免疫功能。胸腺五肽能活化CD4和CD8陽性細胞，使專一的Tc細胞壽命維持更長時間，同時也可活化Th細胞，誘導Ts細胞的功能。胸腺五肽的抗感染力和治療作用與它增進TC細胞活性相關。在抗感染免疫中適量胸腺五肽可明顯增加干擾素的產(chǎn)生。誘導和促進T細胞分化成熟；調(diào)節(jié)T淋巴細胞亞群比例使CD4/CD8趨于正常；增強巨噬細胞吞噬功能；增強紅細胞免疫功能；提高自然殺傷細胞的活力；提高白介素-2的產(chǎn)生水平與受體表達水平；增強外周血單核細胞γ干擾素的產(chǎn)生；增強血清中SOD活性。可用于惡性腫瘤病人經(jīng)放化療后，免疫功能損傷者；乙型肝炎的治療；重大外科手術(shù)及嚴重感染；自身免疫性疾病，如類風濕性關節(jié)炎，紅斑狼瘡；Ⅱ型糖尿病、更年期綜合征；年老體衰免疫功能低下者。

目前胸腺五肽的制備方法成本較高，特別是氨基酸和溶劑的利用率較低，尤其是液相法合成中溶劑使用量大，規(guī)模化生產(chǎn)對場地和人員的要求較高，難以實現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種醋酸胸腺五肽規(guī)模化制備方法。該制備方法利用多批次固相合成，設計了合適套用規(guī)模，能夠利用收集密閉保存的反應多余氨基酸，氨基酸利用率達到67.8%以上。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種醋酸胸腺五肽的規(guī)模化制備方法，包括如下步驟：

步驟1：獲得Tyr-樹脂；

步驟2：以氨基酸為第一原料，取Tyr-樹脂經(jīng)第一逐步偶聯(lián)，逐步偶聯(lián)Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Boc-Arg(Pbf)-OH，進行第一批次固相合成，獲得第一肽片段-樹脂，分別收集逐步偶聯(lián)的反應液作為第一反應液，備用；

步驟3：以第一反應液為第二原料，取Tyr-樹脂經(jīng)第二逐步偶聯(lián)，逐步偶聯(lián)Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Boc-Arg(Pbf)-OH，進行第二批次固相合成，獲得第二肽片段-樹脂樹脂，分別收集第二逐步偶聯(lián)的反應液作為第二反應液，備用；

步驟4：取所述第二反應液并補充氨基酸作為第三原料，取Tyr-樹脂經(jīng)第三逐步偶聯(lián)，逐步偶聯(lián)Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Boc-Arg(Pbf)-OH，進行第三批次固相合成，獲得第三肽片段-樹脂；

步驟5：合并第一肽片段-樹脂、第二肽片段-樹脂和第三肽片段-樹脂，裂解，純化、成鹽即得；

第一批次固相合成、第二批次固相合成與第三批次固相合成的物質(zhì)的量的比為1:0.5～0.8:0.3～0.5。

作為優(yōu)選，本發(fā)明提供的醋酸胸腺五肽的規(guī)模化制備方法中，步驟4中補充氨基酸的物質(zhì)的量與第三批次固相合成的物質(zhì)的量的比為1:1。

作為優(yōu)選，本發(fā)明提供的醋酸胸腺五肽的規(guī)模化制備方法中，步驟1中第一原料的物質(zhì)的量與第一批次固相合成的物質(zhì)的量的比為2～5:1。