[發明專利]鼠尾椎間盤體外三維膠立體培養方法

在審

• 申請號: 201310241689.2
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN104232562A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 李晨光;王擁軍;趙永見;施杞;楊燕萍;牛凱
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學附屬龍華醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 潘詩孟

1.一種鼠尾椎間盤體外三維膠立體培養方法，其特征是，包括如下步驟：

用磷酸鹽緩沖液PBS配制濃度為2wt%的瓊脂糖凝膠，與含10wt%胎牛血清FBS的細胞培養基DMEM培養液按體積比1：1混合形成三維培養膠；

將從活體C57品系小鼠上剪切下來的鼠尾立即消毒并剝皮后投入PBS中清洗；在體視學顯微鏡下，剝除椎旁韌帶顯露椎間盤，沿上下軟骨終板完整的切下椎間盤，用PBS清洗；將前述三維培養膠鋪平培養皿，將椎間盤快速種植入三維培養膠內，待凝固后再加入含10wt%FBS的DMEM培養液覆蓋表面，放入培養箱內，每天更換含10wt%FBS的DMEM培養液一次。

2.根據權利要求1所述的鼠尾椎間盤體外三維膠立體培養方法，其特征是，進一步包括如下步驟：從培養箱內取出培養皿，在37℃恒溫水平搖床內以60rpm頻率搖晃，每次60分鐘，每日早晚各一次，連續刺激兩天。