[發明專利]一種利用DNA熔解溫度分析水稻香味基因的功能標記及其應用

無效

• 申請號: 201310238700.X
• 申請日: 2013-06-17
• 公開（公告）號: CN103436530A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 郭濤;羅文龍;陳志強;王慧;黃翠紅;劉永柱;張建國
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 謝敏楠

1.一種水稻香味基因功能標記BAD2-E7，其特征在于，所述BAD2-E7由一對內側引物BAD2-E7-in-F/BAD2-E7-in-R和一對外側引物BAD2-E7-out-F/BAD2-E7-out-R組成，BAD2-E7-in-F、BAD2-E7-in-R、BAD2-E7-out-F和BAD2-E7-out-R引物序列如SEQ?ID?NO1~4所示。

2.一種權利要求1所述水稻香味基因功能標記BAD2-E7的應用，其特征在于，所述應用為用于區分香型水稻和非香型水稻。

3.一種區分香型水稻和非香型水稻的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.?以待測水稻基因組DNA為模版，利用權利要求1所述的外側引物BAD2-E7-out-F/BAD2-E7-out-R進行PCR擴增；

S2.將步驟S1?PCR擴增的產物稀釋，以之為模版，利用權利要求1所述的內側引物BAD2-E7-in-F/BAD2-E7-in-R進行PCR擴增；

S3.檢測步驟S2擴增所獲的DNA的熔解溫度，如果待測DNA的熔解溫度在79~79.6℃之間，待測水稻為非香型水稻，如果待測DNA的熔解溫度在77.3~77.9℃之間，待測水稻為香型水稻。

4.根據權利要求3所述區分香型水稻和非香型水稻的方法，其特征在于，步驟S2所述的稀釋為稀釋15~20倍。

5.根據權利要求3所述區分香型水稻和非香型水稻的方法，其特征在于，步驟S1所述PCR反應體系為：

?2×Power?Taq?PCR?MasterMix母液?????5?μL；

?????外側引物（10?μmol/L）?????????????各0.3?μL；

?????基因組DNA???????????????????????0.5?μL；

?????雙蒸水補足10?μL；

PCR擴增程序為95℃,?5min;??95℃,?20s;?57℃,?20s;?72℃,?10s;?25個循環；72℃,?5min。

6.根據權利要求3所述區分香型水稻和非香型水稻的方法，其特征在于，步驟S1所述PCR反應體系為：

?????2×Power?Taq?PCR?MasterMix母液?????????4?μL；

?????內側引物（10?μmol/L）?????????????????各0.3?μL；

?????20×EvaGreen染料??????????????????????0.5?μL；

?????稀釋過的第一輪PCR產物??????????????0.5?μL；

?????雙蒸水補足10?μL；

?????PCR擴增程序為95℃,?2min;?95℃,?20s;?59℃,?20s;?72℃,?10s;?共25個循環；72℃,?5min;?95℃,?2min；25℃,?2min。

7.根據權利要求3所述區分香型水稻和非香型水稻的方法，其特征在于，步驟S3所述的熔解溫度曲線為60~95℃的熔解曲線。

8.根據權利要求3所述區分香型水稻和非香型水稻的方法，其特征在于，步驟S3所述的對比，熔解溫度曲線為75~82℃的熔解曲線。