[發明專利]一種批量提取水稻胚乳DNA的方法

有效

• 申請號: 201310238655.8
• 申請日: 2013-06-17
• 公開（公告）號: CN103436524A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 郭濤;羅文龍;陳志強;王慧;陳海英;劉永柱;張建國
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 謝敏楠

1.一種批量提取水稻胚乳DNA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.從水稻種子中切取胚乳；

S2.將胚乳投入PCR板孔中，所述的PCR板命名為T1板；

S3.T1板每孔加入50?~150μL堿液，放入PCR?儀中進行加熱；

S4.取出T1板，每孔投入鎢合金珠及150?~250μL?1×DNA抽提液；

S5.將T1板重新置于PCR儀中進行加熱；

S6.取出T1板，振動3~4?min；

S7.將T1板放入離心機進行離心；

S8.取出T1板，將上清液轉移至另一PCR板中，PCR板命名為T3板，T3

板每孔中預先加入50~150?μL?雙蒸水；

S9.?將T3板置于冰箱中保存；

S4中1×DNA抽提液的組成為pH9.5的Tris、EDTA、?KCl，它們的摩爾比為5~15:0.5~1.5:50~150。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S1中所述從水稻種子中切取

胚乳是指從每粒水稻種子切取1/3的胚乳。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S2中每個PCR板孔中投入

5~8mg胚乳。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S2中所述的堿液為1?mol/?L?

NaOH溶液；加入量為100μL。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S3中的PCR條件為99?℃?

15?min。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S4中1×DNA抽提液的每孔

用量為180μL；Tris?、EDTA和KCl的摩爾比為10:1:100；鎢合金珠每孔加入1粒。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S5中的PCR條件為99?℃，

3?min。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S7中以5000?rpm?離心1?min。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的T1板和T3板為96

孔板。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，S8中使用96針復制器轉移

上清液。