[發明專利]一種巴氏醋桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201310238476.4
• 申請日: 2013-06-17
• 公開（公告）號: CN103305442A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 梁新樂;施結燕
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/02;C12J1/00;C12R1/02
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

1.巴氏醋桿菌（Acetobacterpasteurianus）Ab3,保藏編號為CCTCC?NO：M2013116。

2.如權利要求1所述的巴氏醋桿菌Ab3在發酵生產二羥基神經酰胺中的應用。

3.如權利要求1所述的巴氏醋桿菌Ab3在發酵生產食醋中的應用。

4.一種利用如權利要求1所述的巴氏醋桿菌Ab3發酵生產二羥基神經酰胺的方法，其特征在于包括以下工藝步驟：

1）將所述的巴氏醋桿菌Ab3接種于營養培養基上，進行斜面培養；

2）對斜面培養得到的菌苔進行種子培養，得到種子液；

3）將種子液接種到發酵培養基中培養，得到巴氏醋桿菌Ab3發酵液和細胞菌泥，所述的發酵液即為食醋，所述的細胞菌泥分離提取后獲得二羥基神經酰胺。

5.如權利要求4所述的一種利用巴氏醋桿菌Ab3發酵生產二羥基神經酰胺的方法，其特征在于所述的步驟1）中營養培養基的重量百分配比為5～6Bx^o麥芽汁，0.02～0.05%?KH₂PO₄、0.01～0.03%?MgSO₄、?0.05～0.1%?CaCl₂、乙醇3～5%、瓊脂1.5～2%，所述的營養培養基的pH=4.5～6.5，斜面培養溫度為28～32?℃，培養時間2～4天。

6.如權利要求4所述的一種利用巴氏醋桿菌Ab3發酵生產二羥基神經酰胺的方法，其特征在于所述的步驟2）中用0.9%生理鹽水將斜面上培養的菌苔制成細胞懸液，并接種到100?mL種子培養基中培養，所述的種子培養基的重量百分配比為2～4%葡萄糖、0.5～1%酵母膏、0.1～0.3%蛋白胨、0.08～0.2%?KH₂PO₄、0.01～0.03%?MgSO₄、5～7%乙醇，水余量，所述的種子培養基的pH=4.0～5.0，培養溫度30～33?℃，轉速120rpm，培養時間1～2天。

7.如權利要求4所述的一種利用巴氏醋桿菌Ab3發酵生產二羥基神經酰胺的方法，其特征在于所述的步驟3）中發酵培養基的重量百分配比為3～5%葡萄糖、0.5～1.5%復合氨基酸溶液、0.5～1%酵母膏、0.02～0.05%?KH₂PO₄、0.01～0.03%?MgSO₄、0.05～0.1%?CaCl₂、6～20%乙醇，水余量，所述的發酵培養基pH=4.0～5.0，培養溫度32～35℃，轉速150～450rpm，培養時間2～4天，其中乙醇的使用量在于間歇式補加。

8.如權利要求4所述的一種利用巴氏醋桿菌Ab3發酵生產二羥基神經酰胺的方法，其特征在于所述的步驟3）中細胞菌泥經冷凍干燥后得到干細胞，采用干細胞:提取液按重量比1:1混合，室溫下超聲浸泡1.5小時，加萃取液進行萃取，過濾后所得有機相真空濃縮，獲得二羥基神經酰胺粗品，所述的提取液中氯仿:乙醇:水的體積比為1:1:0.8，所述的萃取液中氯仿:水的體積比為1:1.25。

9.如權利要求8所述的一種利用巴氏醋桿菌Ab3發酵生產二羥基神經酰胺的方法，其特征在于所述的干細胞采用超臨界CO₂萃取，所得CO₂/乙醇流動相動揮發后，獲得獲得二羥基神經酰胺粗品。

10.如權利要求8或9所述的一種利用巴氏醋桿菌Ab3發酵生產二羥基神經酰胺的方法，其特征在于所述的二羥基神經酰胺粗品采用高速逆流色譜分離精制，獲得二羥基神經酰胺精品。