[發明專利]一種從發酵液中分離提取乳酸片球菌素PA-1的方法

有效

• 申請號: 201310237976.6
• 申請日: 2013-06-13
• 公開（公告）號: CN103288932A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 張健;張穎;周志江;韓燁
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種從發酵液中分離提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：步驟如下：?

⑴發酵液預處理?

取含乳酸片球菌素PA-1的發酵液，60-80℃恒溫水浴處理30-60分鐘，冷卻至20-30℃，用濃鹽酸調節pH至2.0-3.0，攪拌，釋放乳酸片球菌素PA-1于發酵液中；?

⑵板框過濾?

在發酵液中加入0.5-1.2%的助濾劑，攪拌，進行板框過濾，棄去濾餅，收集濾液；?

⑶微濾除雜?

將板框過濾后的濾液在溫度25-35℃，壓力為1.0-1.5MPa下通過金屬氧化膜或陶瓷膜過濾，膜的孔徑為5μm，微濾至體積濃縮比3-6倍時，開始洗濾，洗濾液的體積和濃縮液體積相同，最終使濃縮液為初始進料液體積的4-7%，滲透液為乳酸片球菌素PA-1的粗提液；?

⑷超濾除雜?

步驟⑶得到的滲透液在溫度20-30℃，壓力為0.05-0.1MPa下，通過截留分子量為10000-30000道爾頓的超濾膜，超濾至體積濃縮比為4-6時，加入和濃縮液等量的水進行洗濾，至最終濃縮液為料液體積的4-10%為止，收集濾液；?

⑸超濾除雜濃縮?

步驟⑷得到的濾液通過截留分子量為1000-3000道爾頓的超濾膜過濾，超濾操作溫度20-30℃，壓力為0.05-0.1MPa，超濾至體積濃縮比為8-12時為止，收集濃縮液；?

⑹噴霧干燥?

步驟⑸得到的濃縮液，加入填料固體食鹽，在噴霧干燥機進行干燥，進口溫度為120-170℃，出口溫度為70-90℃，使噴霧干燥后含鹽量為25-35%，噴霧干燥，即得乳酸片球菌素PA-1。?

2.根據權利要求1中所述的從發酵液中分離提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：所述助濾劑為硅藻土或珍珠巖。?

3.根據權利要求1中所述的從發酵液中分離提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：所述超濾膜為中空纖維膜。?

4.根據權利要求1中所述的從發酵液中分離提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：所述步驟⑸超濾除雜濃縮后經過如下步驟，獲得乳酸片球菌素PA-1的白色粉末：?

⑺C18制備色譜純化?

步驟⑸得到的濃縮液，經反相C18制備色譜純化，收集保留時間15.0-15.4分鐘的蛋白峰為乳酸片球菌素PA-1活性峰；?

⑻冷凍干燥?

步驟⑺得到的活性峰溶液，可直接冷凍干燥為乳酸片球菌素PA-1的白色粉末。?

5.根據權利要求4中所述的從發酵液中分離提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：步驟⑺的色譜條件如下：?

流動相：A，5%乙腈，含0.1%三氟乙酸；B，80%乙腈，含0.1%三氟乙酸；梯度洗脫程序為0～5min，100%A；5～30min，100%A～100%B；30～35min，100%B；35～42min，100%B～100%A；42～45min，100%A；流速：3mL·min^-1，檢測波長：280nm。?