[發明專利]一種肌紅蛋白納米磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201310234764.2
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN103278651A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 劉萍;欒大偉;宋啟超;董婷婷;李克錦
• 申請（專利權）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

技術領域

本發明涉及免疫分析醫學領域，具體的，本發明提供了一種肌紅蛋白（MYO）納米磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

肌紅蛋白（MYO）是與血紅蛋白相似的血紅素蛋白質。存在于肌肉細胞內，主要功能是儲存氧，在心肌內含量非常豐富。分子量16700，由一條含有153個氨基酸殘基的多肽鏈和一個血紅素輔基構成，呈緊密球形。多肽鏈中氨基酸殘基上的疏水側鏈大都在分子內部，親水側鏈多位于分子表面，因此其水溶性較好。

由于MYO分子量小，所以在肌肉細胞損傷后較早釋放入血循環，1-2h升高，12h達高峰，24h后逐漸下降，是早期診斷急性心肌梗死（AMI）的主要指標，能為AMI的診斷和搶救贏得寶貴時間。

骨骼肌疾病和腎功能障礙時血清MYO濃度也可升高，故MYO不是心肌損傷的特異性標志物。但由于其靈敏度高，一般可用于陰性診斷。如果胸痛發作后8h而MYO仍在正常范圍內，則可排除AMI。

由于在AMI后患者血中MYO很快從腎臟清除，故MYO測定有助于在AMI病程中觀察有無再梗死或梗死再擴展。MYO頻繁增高，提示原有心肌梗死仍在延續。

MYO還是溶栓治療中判斷有無再灌注的敏感而準確的指標。

臨床領域應用的MYO免疫檢測方法主要有膠體金免疫層析法（Gold?immnnochromatography?GICA）、酶聯免疫測定法（Enzyme?Immunoassay，EIA）和化學發光免疫測定（CLIA）等。

膠體金免疫層析法具備操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設備等優點，但由于靈敏度不高、難以實現定量等缺點限制了這種方法的使用。

酶聯免疫測定法由于具備操作簡單、試劑有效期長、無污染、高于膠體金的敏感性、特異性好、結果可用儀器測定等特點得以推廣，但由于敏感性相對較低，所用標記酶與底物可定量測定范圍窄，及儀器測定范圍窄等缺點，限制了其在微量免疫定量測定中的應用。

化學發光免疫測定其研究起步于80年代初，快速發展應用于90年代，為當今最為敏感的微量免疫測定法。主要特點是高敏感性、可測定濃度范圍寬、樣品無需稀釋即可檢測、試劑有效期長、操作簡單、檢測自動化成度高、數據自動生成處理能力強、測定儀器兼容性好、無環境污染等，因而得到了迅速發展與應用。但是檢測靈敏度、測值準確度仍然不高。

發明內容

本發明要解決的問題是提供肌紅蛋白的化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法，避免了膠體金試紙條不能準確定量，酶聯免疫法靈敏度差，檢測范圍窄等缺陷。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：肌紅蛋白（MYO）納米磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，包括：肌紅蛋白校準品；偶聯有鏈霉親和素的納米磁微粒懸浮液；生物素標記的肌紅蛋白抗體；肌紅蛋白抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；肌紅蛋白質控品，質控品包括濃度8-12ng/mL的低值質控品和400-600ng/mL的高值質控品；化學發光液A液和B液，A液為5mmol/L，pH8.6的Tris-HCl緩沖液，且該緩沖液中含有終濃度0.7g/L魯米諾和終濃度0.165g/L對碘酚；B液為0.675g/L過氧化脲；20倍濃縮洗液；反應管。

進一步，所述的納米磁微粒是表面包裹帶有氨基或羧基活性基團的四氧化三鐵，粒徑10-50nm。

進一步，所述的反應管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

（1）肌紅蛋白校準品的配制：

將肌紅蛋白抗原用山羊血清配制成校準品濃儲液，以企業標準品進行定標，將濃儲液用山羊血清稀釋至工作濃度，分別為0，5，25，100，250，1000ng/mL；

企業標準品制備方法：用山羊血清將肌紅蛋白抗原按照1:10、1:10²、1:10³、1:10⁴、1:10⁵、1:10⁶、1:10⁷的比例進行稀釋，使用羅氏公司肌紅蛋白定量檢測試劑盒（貨號：12178214，規格100人份）測定，根據測定結果，建立稀釋比例與測定濃度的曲線。按照曲線方程分別計算出濃度為5，25，100，250，1000ng/mL的稀釋比例，按此比例配制企業標準品，使用羅氏產品進行多次測定，確定企業標準品濃度。配制的企業標準品以0.5mL/管分裝，用冷凍干燥機凍干，-20℃保存。