[發(fā)明專利]利用vgb基因構(gòu)建的抗貧氧高密度發(fā)酵納他霉素基因工程菌株及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310234364.1
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN103555755A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉飛;王紹花;朱希強;凌沛學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省生物藥物研究院
• 主分類號: C12N15/76
• 分類號: C12N15/76;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/62
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.利用透明顫菌血紅蛋白基因(Vitreoscilla?hemoglobin，vgb)構(gòu)建的抗貧氧高密度發(fā)酵納他霉素基因工程菌株及其應(yīng)用，其特征在于：通過PCR擴增得到vgb基因，將vgb基因插入相應(yīng)載體，構(gòu)建整合型重組質(zhì)粒，然后利用接合轉(zhuǎn)移的方式轉(zhuǎn)化褐黃孢鏈霉菌，經(jīng)抗生素抗性篩選獲得整合有vgb基因的重組工程菌株，通過搖瓶發(fā)酵實驗篩選獲得表達(dá)血紅蛋白(VHb)并可直接用于高產(chǎn)納他霉素的重組菌株。

2.權(quán)利要求1所述的利用vgb基因構(gòu)建的抗貧氧高密度發(fā)酵納他霉素基因工程菌株，其特征在于所述vgb基因的啟動子為其自身啟動子。

3.權(quán)利要求1所述的利用vgb基因構(gòu)建的抗貧氧高密度發(fā)酵納他霉素基因工程菌株，其特征在于所述的重組質(zhì)粒為pSET152-vgb。

4.權(quán)利要求1所述的利用vgb基因構(gòu)建的抗貧氧高密度發(fā)酵納他霉素基因工程菌株，其特征在于：所述接合轉(zhuǎn)移的步驟為將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌ET12567(PUZ8002)中，將重組大腸桿菌與褐黃孢鏈霉菌共培養(yǎng)于MS(含10mM?MgCl₂)固體培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)16～20h，然后涂布1mL無菌水(含0.5mg萘啶酮酸和1mg安普霉素)覆蓋平板，30℃繼續(xù)培養(yǎng)至長出轉(zhuǎn)化子。

5.權(quán)利要求1所述的利用vgb基因構(gòu)建的抗貧氧高密度發(fā)酵納他霉素基因工程菌株，其特征在于，所述搖瓶發(fā)酵實驗的條件為28～30℃，轉(zhuǎn)速200～300r/min，發(fā)酵3～5d。

6.權(quán)利要求1～5任一項所述的重組質(zhì)粒及工程菌在制備納他霉素中的應(yīng)用。