[發明專利]一種冠突散囊菌菌絲體提取物的制備方法

有效

• 申請號: 201310233345.7
• 申請日: 2013-06-13
• 公開（公告）號: CN103305565A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 彭呈悅;凌霄;李征
• 申請（專利權）人: 彭呈悅;凌霄;李征
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00;A23L1/29
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技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種冠突散囊菌菌絲體提取物的制備方法，此種提取物有效成分主要為多糖，具有降脂和改善胃腸的功效。

背景技術

茯磚茶是我國西北邊疆少數民族地區一種常見的黑茶飲品，在當地普遍流傳著“茶好金花開，花多茶質好”的說法，其中金花即為冠突散囊菌。冠突散囊菌是在茯磚茶加工過程中，在特定的溫度和濕度條件下，通過“發花”工藝長成的自然益生菌體。邊區群眾以高脂肪食品為主食，然而肥胖者和高脂血癥患病率并不高，這與冠突散囊菌在茶葉中的代謝產物的作用密切相關。

茯磚茶是所有黑茶種類中加工工藝最復雜、時間最長、工藝最獨特的茶類產品，其復雜獨特之處在于為期10～12天的發花過程，磚茶內部長出金黃色的冠突散囊菌閉囊殼。金花菌在茯磚轉化和生成新物質的過程中起到關鍵作用，形成具有減肥降脂作用的功效成分，也形成了其異于其它茶類的品質特征。隨著人們對茯茶內金花認識的逐漸深入，相關保健品也逐漸受到了人們的推崇，顯示出強大的市場活力。

以往對冠突散囊菌的研究主要是以黑毛茶為基質的固態發酵，即制備金花散茶和磚茶，所制備的茯磚茶及其水提物都可起到降脂減肥的功效。隨著對金花認識的深入，對冠突散囊菌的研究逐漸轉向金花孢子的安全性、液態發酵特性、胞外多糖的提取和胞外多糖的功效等研究。

許益清(茯磚茶的真菌菌群特性及其整腸功能研究，2011)按照食品安全性毒理學評價程序，通過動物試驗證實，低劑量的“金花”菌懸液給小鼠灌胃，腸道菌群未失調，并且能夠引起小鼠結腸內的乳酸桿菌和梭菌屬IV簇等種群多樣性增加，說明金花菌對小鼠無毒副作用，符合食品安全標準，可放心食用。鄧放明等(冠突散囊菌胞外多糖生物活性高通量篩選試驗，2007)利用冠突散囊菌發酵液分離出胞外多糖，選用PPARs、K526和HepG2模型初步研究其降脂和抗腫瘤活性，發現胞外多糖對PPARα、PPARγ、PPARδ3種模型均有活性。

茯磚制備過程中，冠突散囊菌代謝產生的酶使茶葉中的茶多酚等物質發生氧化、縮合，使蛋白質和纖維素等大分子物質分解，并使氨基酸、糖類和咖啡堿等各成分之間發生聚合、縮合等一系列復雜的反應，形成了具有保健作用的成分。液體培養冠突散囊菌菌絲體，菌體生長代謝更為活躍，有利于功效成分的積累。菌絲體中含有豐富的多糖、蛋白質、氨基酸等人體益生成分，營養價值高，其中多糖是具有營養保健價值的內含成分。現代液體發酵技術生產菌絲體，具有發酵周期短、成本低、產量大等優勢，可以實現大規模工業化生產。

以上研究為冠突散囊菌保健品的開發提供了理論依據，據文獻報道冠突散囊菌的培養多以采用黑茶浸提液與蔗糖作為培養基成分，許益清通過10L罐發酵培養，菌體干重最高可達3.754g/L，菌絲球直徑5mm。本單位發明研究人員通過實驗發現，在液體發酵的過程中，由于冠突散囊菌有孢子萌發慢的生長特性，在發酵罐培養接近36h才有菌絲長出，菌絲長出后在較短的時間內形成顆粒狀菌絲球，而96h后就開始產大量色素，菌體有衰老跡象，菌絲成球速度快，致使菌絲體中的營養物質不能很好的分泌出來，從而菌絲體含有豐富的多糖、蛋白質、氨基酸等。目前還未有從冠突散囊菌菌絲體中提取有效成分的研究。

現有多糖提取方法中多采用酶法、超聲相結合的處理方式，并用三氯甲烷除蛋白。超聲波法雖然提取率高，但只適合小批量試驗，不適合規模化生產。三氯甲烷具有除蛋白效率高的優點，但有毒性，且成本高，所生產產品不適合開發食用級保健品。本發明對現有相關工藝進行了改進，發酵液經離心收集菌絲體，用水重懸，絞碎，加破壁酶混勻并高壓均質，然后醇沉等步驟，從而提取菌絲體中的有效成分，提高了產品的得率，可以實現規模化生產。

本發明利用液體發酵制備冠突散囊菌菌絲體，并提取其有效成分，為開發高附加值的黑茶產品奠定基礎。服用該有效成分將比傳統飲茶更方便、高效。

發明內容

本發明的目的是提供一種冠突散囊菌菌絲體提取物的制備方法，液體發酵能盡可能多的積累菌絲體，且保持菌絲球大小均一性，并結合多種提取技術，從菌絲體中提取生物活性物質，該物質主要為多糖。

本發明技術方案：

(1)冠突散囊菌液體發酵

菌株來源：冠突散囊菌(Eurotium?cristatum)，購于中國普通微生物菌種保藏管理中心，菌株編號為3.6089。