[發明專利]一種裂殖壺菌的收集方法

有效

• 申請號: 201310232317.3
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN103275877A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 張晉陽;王琳;劉敏勝
• 申請（專利權）人: 新奧科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

技術領域

本發明涉及微藻的收集方法，尤其涉及一種裂殖壺菌的收集方法。

背景技術

DHA，二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對人體非常重要的多不飽和脂肪酸，屬于Ω-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。DHA是神經系統細胞生長及維持的一種主要元素，是大腦和視網膜的重要構成成分，在人體大腦皮層中含量高達20%，在眼睛視網膜中所占比例最大，約占50%。根據現有的研究成果，已知DHA在人體中具有以下重要作用：（1）影響胎兒大腦發育；（2）促進視網膜光感細胞的成熟；（3）增進大腦細胞的發育；（4）減少產后抑郁；（5）用于癌癥治療；（6）抑制發炎；（7）降低血脂肪、預防心臟血管疾病；（8）改善老人癡呆；（9）抑制流感病毒復制；和（10）延長妊娠期預防早產。

目前DHA有三個主要來源，即從雞蛋黃、海藻油或深海魚油中提取。在這三個來源當中，海藻油提取未經過食物鏈傳遞，因此具有純度高、污染風險低等優點，并且從海藻油中提取的DHA還不含有可能導致兒童性早熟的EPA，因此是最為理想的DHA生產來源。

裂殖壺菌（Schizochytrium?limacinum）又稱裂壺藻或裂殖壺藻，屬于真菌門（Eumycota）、卵菌綱（Oomycetes）、水霉目（Saprolegniales）、破囊壺菌科(Thraustochytriaceae)的一類海洋真菌，單細胞、球形。裂殖壺菌細胞積累大量對人體有用的活性物質，如：油脂、色素、角鯊烯等，其中油脂占細胞干重的70%以上，總脂中二十二碳六烯酸(DHA)含量可高達35%～40%，結構類似的脂肪酸含量低，容易分離純化，而且沒有魚腥味。目前，因微藻培養需要光照和CO₂，生產工藝繁雜、成本高，故裂殖壺菌是一種極具實現工業化生產DHA潛力的微生物之一。

目前，裂殖壺菌采收使用的方法有沉降分離、離心收集法、絮凝處理結合固液分離，其中對于沉降分離法，由于裂殖壺菌發酵液在后期所累積油脂較多，使得細胞密度接近于（高于/低于/等于）發酵液密度，使得沉降分離收率較低；而采用傳統的離心收集法也只能收獲50%～60%的細胞，含油脂高的細胞不易收集。

CN200910111657.4公開了一種從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其將裂殖壺菌發酵液絮凝處理再進行固液分離；絮凝處理采用的絮凝劑為硫酸鋁鉀、硫酸鋁、聚合硫酸鐵、聚合氯化鋁、聚硅硫酸鋁或聚硅硫酸鐵；絮凝劑的用量為每升裂殖壺菌發酵液添加10～20g的絮凝劑；固液分離是指在裂殖壺菌細胞沉淀物中按照每升發酵液沉淀物添加3～100ml的質量濃度為95%的食用酒精、靜置棄上層清液，同時將沉降于下層的裂殖壺菌細胞進行離心。該方法其使用的絮凝劑制成的粉末無法直接應用于飼料業，且絮凝劑添加量較大；固液分離采收靜置棄上層的方式，但含油脂較高位于靜置層上層，采收傳統靜置方法無法將其收獲。此外，酒精的添加還會引入酒精回收等后續工序，不適于工業化應用。

CN201010559334.4公開了一種含油微藻的收集方法，其將殼聚糖-路易斯酸絮凝劑加入到含油微藻培養液中，使微藻培養液中路易斯酸濃度為3-9mg/L，殼聚糖濃度為2-30mg/L；攪拌、靜置棄上層清液，將微藻培養液靜置沉淀，微藻絮體進行離心脫水。該方法針對的是海洋微藻類及其用量，由于經發酵后發酵液本身成分復雜，裂殖壺菌較海洋微藻濃度高10～15倍，且裂殖壺菌在成熟期大量含有油脂的細胞上浮至液面頂層，采用該方法無法將含油脂較高的細胞層有效收獲。

綜上所述，本領域中需要更加簡單高效，更適于大規模裂殖壺菌收集，更容易實現工業化大規模生產的裂殖壺菌收集方法。

發明內容

本發明的目的之一在于針對現有傳統收集工藝收率低、添加絮凝劑后不可直接食用及收集率低（難以收集高含油細胞）等問題，提供一種可有效用于大規模裂殖壺菌收集，易實現工業化大規模生產的方法。本發明通過對成熟的裂殖壺菌發酵液進行預處理，使發酵液中不易用傳統離心方法收獲的高含油細胞與可被離心收集的細胞結合成團狀絮體，從而使后續固液分離濃縮物料收得率得以提高。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

在第一方面，本發明提供了一種裂殖壺菌的收集方法，其特征在于，所述方法包括將裂殖壺菌發酵液的pH值調節至≤8.5之后加入絮凝劑進行絮凝沉淀。

在本發明的裂殖壺菌的收集方法中，可將發酵液pH值調節至5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.5。