[發明專利]用于牛鞭草品種鑒定的EST-SSR分子標記引物組及牛鞭草品種鑒定方法

無效

• 申請號: 201310231418.9
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN103305615A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 黃琳凱;張新全;黃秀;張瑜;閆艷紅;嚴海東;曾兵;馬嘯;彭燕;梁小玉;季楊
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術領域

發明涉及植物遺傳育種技術領域，尤其涉及用于牛鞭草品種鑒定的EST-SSR分子標記引物組及牛鞭草品種鑒定方法。

背景技術

牛鞭草屬(Hemarthria?R.Br.)植物是禾本科黍亞科多年生草本，分布較廣，種類較多，全世界有近20個種，其中扁穗牛鞭草(H.compressa)和牛鞭草(H.altissima)產量高、品種好、適應能力強，是亞熱帶重要的多年生禾本科牧草之一。目前世界范圍內牛鞭草屬共登記的7個品種也屬此兩個種，為我國育成登記的3個扁穗牛鞭草栽培品種“廣益”、“重高”和“雅安”以及美國登記的4牛鞭草品種Redalta、Greenalta、Bigalta和Floralta。其中，“廣益”、“重高”、“雅安”、“Redalta”、“Greenalta”和“Bigalta”為目前我國最常見的牛鞭草品種。牛鞭草屬因其具有生長速度快、再生力強、產量高、適應性和抗逆性較強、水土保持能力優良等優點，已在熱帶、亞熱帶地區得到廣泛利用，為當地畜牧業發展和生態環境建設作出了突出貢獻，在草地農業系統中占有重要地位。

優良品種是牧草高產的重要基礎，牧草種子（苗）質量是牧草品種特性的重要組成部分，牧草品種的真假和種子（苗）質量的優劣直接關系到草業的健康發展。為防止假劣種苗冒充牛鞭草屬品種坑農害農，阻礙牛鞭草屬優良品種推廣和利用，侵害育種家利益的現象發生。因此，采用日臻完善的分子標記技術，構建牛鞭草屬品種DNA指紋圖譜，從而鑒定牛鞭草屬種質資源的真實性和保護牛鞭草屬品種的知識產權已成為當務之急。

分子標記技術由于具有快速簡便，可以實現高通量等優點，已被廣泛應用于種質資源遺傳多樣性分析、品種指紋圖譜及純度鑒定、作物遺傳連鎖圖譜構建等方面。利用分子標記技術建立DNA指紋圖譜則是鑒別品種、品系和選擇雜交親本的有力工具。目前用于構建植物DNA指紋圖譜的標記技術主要有RFLP(restriction?fragment?length?polymorphism，限制性片段長度多態性)、SSR(simple?sequence?repeat，簡單重復序列)、AFLP(amplified?fragment?length?polymorphism，擴增片段長度多態性)、RAPD(randomly?amplified?polymorphic?DNA，隨機擴增多態性DNA)、SCoT（Start?codon?targeted?polymorphism，目標起始密碼子多態性）及小衛星等。EST-SSR（expressed?sequence?tags?SSR）是存在于表達序列標簽（expressed?sequence?tags）中的簡單重復序列是兩種新型的分子標記技術，比以往分子標記具有更多優點。EST-SSR具有SSR多態信息含量高、重復性好等特點，相比SSR，其開發不需要構建DNA文庫及克隆測序等步驟，更為節省成本和時間，

牛鞭草屬靠根莖繁殖，品種內遺傳穩定性好，其構建的指紋圖譜比異花授粉植物構建的指紋圖譜重復性更好，能更好的起到參照作用。但是，由于很難尋找到適合大部分牛鞭草的EST-SSR分子標記引物，而若篩選出的引物不能鑒定出大部分的牛鞭草品種，則該引物也不具有使用價值。因此，目前尚沒有關于牛鞭草屬品種EST-SSR分子標記引物方面的報道。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供牛鞭草品種鑒定的EST-SSR分子標記引物組及牛鞭草品種鑒定方法，采用本發明提供的牛鞭草品種鑒定的EST-SSR分子標記引物及牛鞭草品種鑒定方法，可對我國最常見的6個牛鞭草品種進行準確鑒定。

本發明提供了一種用于牛鞭草品種鑒定的EST-SSR分子標記引物組，由具有SEQ?ID?NO:1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ?ID?NO:2所示核苷酸序列的下游引物組成。

作為優選，本發明提供的EST-SSR分子標記引物組可鑒定的牛鞭草品種為：廣益、重高、雅安、Redalta、Greenalta和Bigalta。

采用本發明提供的EST-SSR分子標記引物組對牛鞭草6個品種進行鑒定，結果表明，無任何兩品種之間的遺傳相似度達到100%，即：每份資源都有唯一的指紋圖譜。采用本發明提供的EST-SSR分子標記引物組可把牛鞭草屬6個品種材料全部區分開。

本發明還提供了一種牛鞭草品種的鑒定方法，包括以下步驟：

步驟1：采用具有SEQ?ID?NO:1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ?ID?NO:2所示核苷酸序列的下游引物對待鑒定牛鞭草的基因組DNA進行擴增，獲得擴增產物；