[發明專利]用于牛鞭草品種鑒定的EST-SSR分子標記引物組及牛鞭草品種鑒定方法

無效

• 申請號: 201310231418.9
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN103305615A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 黃琳凱;張新全;黃秀;張瑜;閆艷紅;嚴海東;曾兵;馬嘯;彭燕;梁小玉;季楊
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

1.一種用于牛鞭草品種鑒定的EST-SSR分子標記引物組，其特征在于，由具有SEQ?ID?NO:1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ?ID?NO:2所示核苷酸序列的下游引物組成。

2.根據權利要求1所述的EST-SSR分子標記引物組，其特征在于，用所述EST-SSR分子標記引物組鑒定的牛鞭草品種為：廣益、重高、雅安、Redalta、Greenalta和Bigalta。

3.一種牛鞭草品種的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：采用如權利要求1所述的EST-SSR分子標記引物組對待鑒定牛鞭草的基因組DNA進行擴增，獲得擴增產物；

步驟2：取所述擴增產物電泳，根據所述電泳結果判斷所述待鑒定牛鞭草的品種；

所述判斷為，當所述電泳結果在229bp、183bp、182bp、140bp、138bp和137bp處呈現條帶，則所述待鑒定牛鞭草的品種為Redalta；

當所述電泳結果在231bp、184bp、182bp、140bp、和137bp處呈現條帶，則所述待鑒定牛鞭草的品種為Greenalta；

當所述電泳結果在229bp、183bp、182bp、140bp、139bp和137bp處呈現條帶，則所述待鑒定牛鞭草的品種為Bigalta；

當所述電泳結果在229bp、182bp、177bp、139bp、137bp和117bp處呈現條帶，則所述待鑒定牛鞭草的品種為廣益；

當所述電泳結果在229bp、182bp、139bp、137bp和117bp處呈現條帶，則所述待鑒定牛鞭草的品種為雅安；

當所述電泳結果在229bp、210bp、182bp、139bp、137bp和117bp處呈現條帶，則所述待鑒定牛鞭草的品種為重高。

4.根據權利要求1所述的牛鞭草品種的鑒定方法，其特征在于，所述電泳的介質為聚丙烯酰胺凝膠。

5.根據權利要求4所述的牛鞭草品種的鑒定方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝膠中所述聚丙烯酰胺的質量分數為6%。

6.根據權利要求1所述的牛鞭草品種的鑒定方法，其特征在于，所述擴增的程序為：

94℃預變性5min；

94℃變性1min，52℃退火1min，72℃延伸1.5min，共35個循環；

72℃延伸10min。

7.一種適用于如權利要求3～6任一項所述牛鞭草品種鑒定方法的試劑盒，其特征在于，包括具有SEQ?ID?NO:1所示核苷酸序列的上游引物、具有SEQ?ID?NO:2所示核苷酸序列的下游引物，及牛鞭草屬6個品種指紋圖譜標準模式圖；

所述牛鞭草屬6個品種指紋圖譜標準模式圖顯示：

對牛鞭草品種Redalta的擴增結果呈現229bp、183bp、182bp、140bp、138bp和137bp大小的條帶；

對牛鞭草品種Greenalta的擴增結果呈現231bp、184bp、182bp、140bp、和137bp大小條帶；

對牛鞭草品種Bigalta的擴增結果呈現229bp、183bp、182bp、140bp、139bp和137bp大小條帶；

對牛鞭草品種廣益的擴增結果呈現229bp、182bp、177bp、139bp、137bp和117bp大小條帶；

對牛鞭草品種雅安的擴增結果呈現229bp、182bp、139bp、137bp和117bp大小條帶；

對牛鞭草品種重高的擴增結果呈現229bp、210bp、182bp、139bp、137bp和117bp大小條帶。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包括Taq酶。