[發明專利]一株失活乙酰乳酸合成酶的工程菌及其在生產1,3-丙二醇中的應用

無效

• 申請號: 201310230847.4
• 申請日: 2013-06-09
• 公開（公告）號: CN103305543A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 周勝;秦啟偉;李莉莉;黃友華;高任
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N15/03;C12N1/21;C12P7/18;C12R1/22;C12R1/19
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種失活乙酰乳酸合成酶的工程菌的構建方法，其特征在于，是將產1,3-丙二醇的野生型菌株中的乙酰乳酸合成酶基因敲除后獲得的工程菌。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述的將產1,3-丙二醇的野生型菌株中的乙酰乳酸合成酶基因敲除是通過以下方法敲除：

a、PCR擴增產1,3-丙二醇的野生型菌株的乙酰乳酸合成酶基因的部分同源序列，將其與自殺載體相連，然后再導入雜交供體菌株中；

b、將步驟a獲得的攜帶有乙酰乳酸合成酶基因的部分同源序列與自殺載體的供體菌與產1,3-丙二醇的野生型菌株進行雙親本雜交，利用同源重組、基因插入失活，經篩選后獲得乙酰乳酸合成酶基因被沉默的失活乙酰乳酸合成酶的工程菌。

3.根據權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于，所述的1，3-丙二醇的野生型菌株為克雷伯氏菌屬(Klebsiella)的細菌。

4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于，所述的1，3-丙二醇的野生型菌株為肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella?pneumoniae)。

5.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，當所述的產1，3-丙二醇的野生型菌株為肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella?pneumoniae)時，所述的步驟a的PCR擴增肺炎克雷伯氏菌的乙酰乳酸合成酶基因的部分同源序列是以肺炎克雷伯氏菌的基因組DNA為模板，以上游引物ALS-F：gcgaattctggacaaacagtatccggtacgc與下游引物ALS-R：tagagctcacagaatctgactcagatgcag組成的引物進行PCR擴增得到的序列。

6.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的自殺載體為自殺載體pGPCm。

7.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的雜交供體菌株為大腸桿菌SM10(λpir)。

8.一種按照權利要求1、2、4、5、6或7所述的構建方法構建的失活乙酰乳酸合成酶的工程菌。

9.權利要求8所述的失活乙酰乳酸合成酶的工程菌在生產1，3-丙二醇中的應用。