[發(fā)明專利]一種天麻種子萌發(fā)菌的生產(chǎn)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310228268.6
• 申請(qǐng)日: 2013-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN103798056A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 程立君
• 主分類號(hào): A01G1/04
• 分類號(hào): A01G1/04
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種天麻種子萌發(fā)菌的生產(chǎn)方法。?

背景技術(shù)

天麻(Gastrodia??elata??Blume)為名貴的傳統(tǒng)中藥，屬蘭科(Orchidaceae)多年生共生草本植物，無(wú)根無(wú)綠色葉片，不能進(jìn)行光合作用營(yíng)自養(yǎng)生活。天麻種子細(xì)小如粉塵，無(wú)胚乳及其他營(yíng)養(yǎng)貯備，無(wú)外源營(yíng)養(yǎng)供給，種子不能發(fā)芽，必需依靠萌發(fā)菌侵染后才能正常發(fā)芽，其后的生長(zhǎng)又需要蜜環(huán)菌菌索的侵入提供營(yíng)養(yǎng)才能繼續(xù)生長(zhǎng)完成其生活史。不同萌發(fā)菌所提供的營(yíng)養(yǎng)對(duì)天麻種子萌發(fā)和種子發(fā)芽后形成的原球莖生長(zhǎng)均有較大影響，因此生產(chǎn)優(yōu)良的萌發(fā)菌栽培種，是天麻有性繁殖栽培成敗的關(guān)鍵所在，對(duì)提高天麻種植過程中種子發(fā)芽率和天麻產(chǎn)量都有十分重要影響。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于通過改變天麻種子萌發(fā)菌生產(chǎn)工藝，縮短了萌發(fā)菌栽培種生產(chǎn)周期，實(shí)現(xiàn)了生產(chǎn)與種植環(huán)節(jié)的有效對(duì)接，解決萌發(fā)菌栽培種生長(zhǎng)慢、成品率低、質(zhì)量差的問題，提供一種可工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)萌發(fā)菌栽培種的方法。?

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案：在野外采集萌發(fā)菌菌源分離純化篩選后，制備斜面母種和液體種子菌，將種子菌碎化后進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)得到大量菌絲體，接種至栽培袋中。?

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的具體步驟如下。?

（1）????菌種分離：在云南彝良小草壩烏天麻主產(chǎn)區(qū)，采集萌發(fā)菌菌源分離純化篩選得到萌發(fā)菌菌株。?

（2）????母種的制備：配制試管斜面培養(yǎng)基，將萌發(fā)菌菌種接種于試管斜面培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱，25℃培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。每升試管斜面培養(yǎng)基包含以下成分：馬鈴薯100-300g、葡萄糖10-30g、玉米粉1-5g、磷酸氫二鉀0.1-2g、磷酸二氫鉀0.1-5g、硫酸鎂0.1-5g、維生素10mg、瓊脂10-30g、pH值5.5-8。?

（3）????液體種子菌的制備：熬制液體種子培養(yǎng)基后分裝至1L的三角瓶中，濕熱滅菌后冷卻備用。在無(wú)菌操作臺(tái)上接種萌發(fā)菌菌種塊，置于25℃恒溫?fù)u床上培養(yǎng)4-8天，轉(zhuǎn)速120r/min。每升液體種子培養(yǎng)基主要成分為：馬鈴薯100-300g、殼斗科樹木的落葉10-50g、葡萄糖10-30g、麥麩5-30g、玉米粉0-10g、磷酸二氫鉀0.1-10g、硫酸鎂0.1-5g、pH值5.5-8。?

（4）????液體深層發(fā)酵生產(chǎn)：液體發(fā)酵可以采用一級(jí)或分級(jí)進(jìn)行擴(kuò)繁生產(chǎn)。配制液體發(fā)酵培養(yǎng)液裝入發(fā)酵罐中，滅菌冷卻后，接種碎化后的液體種子菌，同時(shí)加入青霉素0.96-1.92g。液體發(fā)酵培養(yǎng)液的主要成分為：馬鈴薯50-200g/L、紅糖5-20g/L、葡萄糖5-30g/L、玉米粉1-30g/L、麥麩10-60g/L、蛋白胨1-4g/L、磷酸二氫鉀0.5-4g/L、硫酸鎂0.25-3g/L、維生素10mg/L、pH值5.5-8。發(fā)酵條件為：培養(yǎng)溫度24-27℃，罐壓0.02-0.04Pa，通氣量1:0.3-0.5v/v.m,培養(yǎng)時(shí)間72-96h培養(yǎng)液變粘稠。?

（5）????栽培種培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：將基質(zhì)按配比樹葉40-80%、玉米秸稈粉0-20%、木屑8-35%、麥麩5-20%、石灰1-2%混合均勻pH值5.5-7，裝入聚丙烯袋中，封口后121℃高壓滅菌。?

（6）????接種培養(yǎng)：發(fā)酵罐中培養(yǎng)液較粘稠時(shí)，在無(wú)菌環(huán)境下用接種槍將培養(yǎng)液接種至栽培種培養(yǎng)基上，接種量為10-20mL，25℃培養(yǎng)30-45天后菌絲長(zhǎng)滿即可使用。?

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但實(shí)施例并不是對(duì)本發(fā)明的限定。?

實(shí)施例一?

1．菌種分離：在在云南彝良小草壩烏天麻主產(chǎn)區(qū)，采集萌發(fā)菌菌源分離純化篩選得到萌發(fā)菌菌株，菌株編號(hào)HL-001，菌種保藏號(hào)：CGMCC?No.6759，分類命名：小菇Mycena?sp.,保藏時(shí)間：2012年11月05日，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏單位地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。

2．母種的制備：配制試管斜面培養(yǎng)基，將萌發(fā)菌菌種接種于試管斜面培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱，25℃培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。每升試管斜面培養(yǎng)基包含以下成分：馬鈴薯200g、葡萄糖15g、玉米粉2g、磷酸氫二鉀1g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、維生素10mg、瓊脂15g、pH值7。?