[發明專利]基于切刻內切酶恒溫擴增技術的ATP或NAD的系統及檢測方法無效
| 申請號： | 201310228082.0 | 申請日： | 2013-06-08 |
| 公開（公告）號： | CN103276096A | 公開（公告）日： | 2013-09-04 |
| 發明（設計）人： | 馬昌杯;夏昆;陳漢春;何海倫 | 申請（專利權）人： | 中南大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/25 |
| 代理公司： | 長沙市融智專利事務所 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410083 湖南*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 切刻內切酶 恒溫 擴增 技術 atp nad 系統 檢測 方法 | ||
1.基于切刻內切酶恒溫擴增技術的ATP或NAD的系統，其特征在于，該系統由尾部一端帶有熒光標記、另一端帶有熒光標記或者熒光熄滅基團的分子信標核酸探針，與分子信標環部配對的兩個核酸片段、DNA或RNA核酸連接酶、以及切刻內切酶在緩沖溶液中組成。
2.根據權利要求1所述的系統，其特征在于，檢測ATP的體系配制如下：在含有66mM?pH8.0的Tris-HCl、6.6mM?MgCl2和10mM?DTT的100μL反應緩沖液中加入300nM分子信標5'-(TAMRA)–CCTCTC?TGA?GTG?CAT?TCC?AGT?ACG?GAGAGG-(DABCYL)-3'、1.4U的T4DNA連接酶，4U的Nb.Bsm?I切刻內切酶,200nM核酸片段5'-ATG?CAC?TC-3'和200nM另一核酸片段5'-CGT?ACT?GGA-3'；
檢測NAD的體系配制如下：在含有30mM?pH8.0Tris-HCl、2.5mM?CaCl2、5mM?DTT、10mM?MgCl2、1.2mM?EDTA和0.05﹪BSA的100μL反應緩沖液中加入300nM分子信標5'-(TAMRA)–CCTCTC?TGA?GTG?CAT?TCC?AGT?ACG?GAGAGG-(DABCYL)-3'、6.0U的E.coli?DNA連接酶，4U的Nb.Bsm?I切刻內切酶，200nM核酸片段5'-ATG?CAC?TC-3'和200nM另一核酸片段5'-CGT?ACT?GGA-3'。
3.采用權利要求1或2所述的系統檢測ATP或NAD的方法，其特征在于：
將緩沖體系在37℃溫育，同時監測熒光強度，待熒光穩定后加入ATP或NAD樣品，觀察并記錄熒光強度的變化。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，熒光檢測所用波長根據分子信標修飾的熒光染料來選擇，激發波長為338-560nm,發射波長為500-660nm。
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