[發明專利]多重PCR檢測方法及試劑盒有效
| 申請號： | 201310227525.4 | 申請日： | 2013-06-08 |
| 公開（公告）號： | CN103276094A | 公開（公告）日： | 2013-09-04 |
| 發明（設計）人： | 張建東;譚曉利 | 申請（專利權）人： | 瀚吉康生物科技（北京）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129 | 代理人： | 張濤 |
| 地址： | 102206 北京市昌*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 多重 pcr 檢測 方法 試劑盒 | ||
1.一種多重PCR檢測方法，包括以下步驟：
（1）根據靶標基因序列，分別設計上游引物、下游引物、共同引物和探針序列：
所述上游引物與靶標基因序列的上游序列相同；
所述下游引物由3'端特異結合區、外源標簽序列區和下游共同引物區三部分組成；所述3'端特異結合區與靶標基因序列特異雜交；所述外源標簽序列區與所述探針序列完全互補或含有限數目核苷酸錯配；所述下游共同引物區與所述共同引物序列相同；
所述共同引物的3'端標記熒光素；
所述探針序列與目的基因序列無顯著同源性，且3'端標記熒光素；
（2）配置多重PCR反應體系：所述多重PCR反應體系包括：Taq?DNA聚合酶、PCR緩沖液、Mg2+、dNTP、探針、上游引物、下游引物和共同引物，其中，上游引物與下游引物濃度相同，共同引物濃度為上游引物或下游引物濃度的10-20倍；
（3）進行PCR擴增，在PCR擴增周期結束后，進行熔解曲線分析；當探針與外源標簽序列完全匹配時，Tm值最高；Tm值隨著探針與外源標簽序列的錯配數目增多而降低。
2.根據權利要求1所述的多重PCR檢測方法，其特征在于：所述外源標簽序列對應于特異的目的基因序列。
3.根據權利要求2所述的多重PCR檢測方法，其特征在于：所述外源標簽序列區與所述探針序列含有限數目核苷酸錯配為所述外源標簽序列區與所述探針序列有1-3個堿基錯配。
4.根據權利要求1-3中任一所述的多重PCR檢測方法，其特征在于：所述共同引物的3'端標記熒光素為熒光素供者，所述探針的3'端標記熒光素為熒光素受者，所述熒光素供者與所述熒光素受者在相距小于3個堿基距離時發生能量共振轉移。
5.根據權利要求4所述的多重PCR檢測方法，其特征在于：所述探針序列的長度為15-35個核苷酸堿基，Tm值為55℃-75℃。
6.根據權利要求5所述的多重PCR檢測方法，其特征在于：所述上游引物的長度為15-30個核苷酸堿基；所述下游引物長度為45-80個核苷酸堿基。
7.一種用于檢測人肌動蛋白的多重PCR試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含以下序列：
上游引物序列BA1FP：序列表中序列1；
下游引物序列BA1RP：序列表中序列2；
上游引物序列BA2FP：序列表中序列3；
下游引物序列BA2RP：序列表中序列4；
上游引物序列BA3FP：序列表中序列5；
下游引物序列BA3RP：序列表中序列6；
通用引物序列：序列表中序列7；
探針序列：序列表中序列8。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于瀚吉康生物科技（北京）有限公司，未經瀚吉康生物科技（北京）有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201310227525.4/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
