[發明專利]一種在磁珠表面共價偶聯蛋白質的方法無效
| 申請號： | 201310226070.4 | 申請日： | 2013-06-07 |
| 公開（公告）號： | CN103323603A | 公開（公告）日： | 2013-09-25 |
| 發明（設計）人： | 郭建夫;楊寶君;韓學棟;周玉祥 | 申請（專利權）人： | 博奧生物有限公司;清華大學 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/531;G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 102206 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表面 共價 蛋白質 方法 | ||
1.一種在磁珠表面共價偶聯蛋白質的方法，包括如下步驟：
（1）將磁珠與活化劑共孵育，得到活化后的磁珠；
（2）將所述活化后的磁珠與蛋白質共孵育，得到偶聯有所述蛋白質的磁珠；
（3）將所述偶聯有所述蛋白質的磁珠用封閉液進行處理，封閉表面的活性位點；
（4）將步驟（3）得到的磁珠邊進行振蕩邊過篩，收集過篩后的磁珠。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（1）中，所述磁珠為羧基磁珠。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟（1）中，所述活化后的磁珠表面具有含N-羥基丁二酰亞胺鍵的化學基團。
4.如權利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述步驟（1）中，所述活化劑為EDC和NHS，或所述活化劑為EDC和Sulfo-NHS。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：
所述步驟（1）中，所述共孵育的反應體系為pH4.0-7.0、0.01-0.1M的MES緩沖液；
所述步驟（1）中，所述活化劑為EDC和NHS時，所述EDC的初始濃度為0.1-30mM，所述NHS的初始濃度為0.3-100mM；
所述步驟（1）中，所述活化劑為EDC和Sulfo-NHS時，所述EDC的初始濃度為0.1-30mM，所述Sulfo-NHS的初始濃度為0.3-100mM；
所述步驟（1）中，所述共孵育的時間為6-300分鐘，優選為10-240分鐘。
6.如權利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟（2）中，所述共孵育的反應體系為pH4.0-7.0、0.01-0.1M的MES緩沖液；所述步驟（2）中，所述共孵育的條件為：2-26℃、2-20小時。
7.如權利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟（3）中，所述封閉液為含0.2-5g/100mL封閉蛋白的緩沖液；所述緩沖液為MES緩沖液、PBS緩沖液或Tris緩沖液；所述步驟（3）中，所述“將所述偶聯有所述蛋白質的磁珠用封閉液進行處理”的處理時間為1-9小時。
8.如權利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟（4）中，所述過篩為過800目-1500目篩。
9.權利要求1至8中任一所述方法制備得到的磁珠產品。
10.權利要求9所述磁珠產品在鑒定和/或分離與所述蛋白質結合的物質中的應用。
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