[發(fā)明專利]一種固定化脂肪酶及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310222770.6
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103232992A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何冰芳;李文豪;汪斌;趙洋陽;吳斌
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12P7/62;C12P41/00;C12N9/20
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務(wù)所 32230
• 代理人: 徐蓓

1.?一種固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）載體制備

利用硅烷偶聯(lián)劑對預(yù)處理后的介孔TiO₂進(jìn)行表面疏水改性；

（2）脂肪酶的固定化

在表面改性后的介孔TiO₂中加入脂肪酶溶液，攪拌吸附，離心，將沉淀用磷酸緩沖液洗滌直至無蛋白檢出，冷凍干燥，得到固定化脂肪酶。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述介孔TiO₂進(jìn)行表面改性的具體方法為：取預(yù)處理后的介孔TiO₂，加入甲苯，預(yù)熱5~20min,?再加入硅烷偶聯(lián)劑，在N₂保護(hù)下，30~90℃攪拌，回流反應(yīng)1~24h，離心棄上清，將沉淀用甲苯、丙酮、無水乙醇依次分別洗滌后，真空干燥得表面改性的介孔TiO₂。

3.?根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述預(yù)處理的介孔TiO₂與甲苯的質(zhì)量體積比按g/mL計為1:100~500；優(yōu)選范圍為1:100~300，最優(yōu)配比為1:200；?

所述預(yù)處理的介孔TiO₂與硅烷偶聯(lián)劑的質(zhì)量摩爾比以g/mmol計為10~1:1，優(yōu)選為2:1。

4.?根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述介孔TiO₂預(yù)處理的具體方法為：向介孔TiO₂中加入混合溶液，50~90℃攪拌回流1~5?h，離心棄上清，沉淀用蒸餾水洗滌至pH值中性，真空干燥，得預(yù)處理后的介孔TiO₂；

所述混合溶液由濃硫酸與30%過氧化氫按體積比9~1：1組成；

所述介孔TiO₂與混合溶液的質(zhì)量體積比以g/mL計為1:10~100。

5.?根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述硅烷偶聯(lián)劑選自3-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-（2,3-環(huán)氧丙氧基）丙基三甲氧基硅烷、3-（2-氨乙基）-氨丙基三甲氧基硅烷、十六烷基三甲氧基硅烷、或者3-（苯基氨基）丙基三甲氧基硅烷中的一種或兩種以上；

優(yōu)選的硅烷偶聯(lián)劑是3-氨丙基三乙氧基硅烷或者3-（苯基氨基）丙基三甲氧基硅烷；

最優(yōu)選的硅烷偶聯(lián)劑是3-（苯基氨基）丙基三甲氧基硅烷。

6.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述表面改性的介孔TiO₂與脂肪酶溶液的質(zhì)量體積比以g/mL計為1:?5~50；所述脂肪酶溶液的蛋白含量在0.05-5?mg/mL之間。

7.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）在表面改性后的介孔TiO₂中加入脂肪酶溶液，在20~50℃下攪拌吸附反應(yīng)3~36h，離心，將沉淀用磷酸緩沖液洗滌直至無蛋白檢出，冷凍干燥，得到固定化脂肪酶。

8.?一種權(quán)利要求1-7所述制備方法得到的固定化脂肪酶。

9.?權(quán)利要求8所述的固定化脂肪酶在水相中催化水解反應(yīng)、在有機(jī)相中催化酯化反應(yīng)、轉(zhuǎn)酯反應(yīng)和/或手性拆分中的應(yīng)用。