[發(fā)明專利]一種甘蔗渣多糖分離純化的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310221570.9
• 申請(qǐng)日: 2013-06-05
• 公開（公告）號(hào): CN103333265A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉強(qiáng);張斌;劉莉;朱紅霞;李沙沙;江曉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 周端儀

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種應(yīng)用生物工程技術(shù)從甘蔗渣中分離純化甘蔗渣多糖的方法。

背景技術(shù)

甘蔗渣是制糖工業(yè)的主要副產(chǎn)品，是甘蔗機(jī)械壓制后所剩的主要部分，屬于農(nóng)業(yè)固體廢棄物中的一種，我國(guó)有多個(gè)省份種植甘蔗，海南、廣東、廣西、福建、云南都是我國(guó)重要的產(chǎn)糖省份，每年均有大量的甘蔗渣產(chǎn)生，多數(shù)沒有得到有效的高值化利用，有的甚至棄于路邊，造成環(huán)境污染。尋找高值化的途徑綜合利用甘蔗渣具有重要意義。多糖是由十幾個(gè)甚至上千個(gè)單糖分子縮合、失水而成，是一類分子機(jī)構(gòu)復(fù)雜且龐大的糖類物質(zhì)，近年來受到了越來越廣泛的關(guān)注，研究表明多糖具有極其廣泛的生物活性。

多糖的提取多采用水提醇沉法，亦有采用超聲提取多糖的方法（專利：一種從甘蔗渣中提取多糖的方法CN101171956）。研究表明甘蔗渣中提取的多糖具有免疫增強(qiáng)、抗腫瘤、抗病毒、降血糖、降血脂的作用。由于多糖成分復(fù)雜，所以其組分的分離和純化對(duì)于多糖的利用具有至關(guān)重要的作用，對(duì)進(jìn)一步的化學(xué)結(jié)構(gòu)研究和藥理機(jī)制的闡明具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種甘蔗渣多糖分離純化的方法，其不影響多糖天然的結(jié)構(gòu)，保留了其生物活性。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種甘蔗渣多糖分離純化的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）脫脂：取甘蔗渣以乙醇浸泡、回流，濾過后濾渣烘干；

（2）提取：步驟（1）所得濾渣經(jīng)水提醇沉法得粗多糖；

（3）脫蛋白：步驟（2）所得粗多糖用水溶解，通過sevag法將蛋白分離；

（4）透析：步驟（3）所得的粗品濃縮，離心，將上清液在水中透析，去除小分子雜質(zhì)，收集甘蔗渣多糖溶液；

（5）冷凍干燥：步驟（4）所得甘蔗渣多糖濃縮后冷凍干燥，得甘蔗渣多糖干品；

（6）純化：將步驟（5）所得甘蔗渣多糖經(jīng)離子交換色譜法與凝膠色譜法純化；

（7）冷凍干燥，得到甘蔗渣多糖純品粉末。

本發(fā)明是從甘蔗渣中通過熱水提取有生物活性的粗多糖、脫蛋白、除鹽、柱層析純化和冷凍干燥，建立了多糖的分離純化工藝，獲取均一分子量的多糖，具有免疫調(diào)節(jié)和降血脂活性，對(duì)進(jìn)一步研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)和闡明其藥理活性機(jī)制有重要意義，本發(fā)明采用的離子交換色譜柱具有開放性的骨架，多糖能自由進(jìn)入載體中并進(jìn)行迅速擴(kuò)散，有較大的表面積，對(duì)多糖的吸附量較離子交換樹脂大許多，本發(fā)明通過離子交換色譜法與凝膠色譜法結(jié)合對(duì)多糖進(jìn)行深化分離以得到精多糖。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析分離出2個(gè)組分的圖譜；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例1中第1組分Sephadex?G-100凝膠層析圖譜；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例1中第2組分Sephadex?G-100凝膠層析圖譜；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例1中第1組分Sephacryl?S-300凝膠層析圖譜；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例1中第2組分Sephacryl?S-300凝膠層析圖譜。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明是一種甘蔗渣多糖分離純化的方法，包括以下步驟：

（1）脫脂：取甘蔗渣以乙醇浸泡、回流，濾過后濾渣烘干。優(yōu)選的，取一定量的甘蔗渣，加入6-12倍量95%乙醇浸泡30-60min，回流4-8h，濾過，濾渣烘干。

（2）提取：步驟（1）所得濾渣經(jīng)水提醇沉法得粗多糖。優(yōu)選的，水提醇沉法是：將步驟（1）所得濾渣依次加8-12倍量、6-10倍量水回流提取一次以上，每次2-4h，濾過合并濾液，濾液濃縮，加3-5倍量95%乙醇，靜置，抽濾，濾渣經(jīng)干燥得粗多糖。

（3）脫蛋白：步驟（2）所得粗多糖用水溶解，通過sevag法將蛋白分離。優(yōu)選的，sevag法是：將步驟（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，將氯仿按多糖溶液1/5體積加入，隨之加入氯仿體積1/5的正丁醇，混合劇烈振搖攪拌后，以2000-6000rpm，10-30min離心，出去蛋白，如此重復(fù)7-10次。

（4）透析：步驟（3）所得的粗品濃縮，離心，將上清液在水中透析，去除小分子雜質(zhì)，收集甘蔗渣多糖溶液。優(yōu)選的，透析是：步驟（3）所得的粗品濃縮，離心，得上清液，用截留分子量3000的透析袋將上清液在流水中透析40-55h，再在去離子水中透析20-30h，收集甘蔗渣多糖溶液。

（5）冷凍干燥：步驟（4）所得甘蔗渣多糖濃縮后冷凍干燥，得甘蔗渣多糖干品。