[發明專利]溫敏性固定化木瓜蛋白酶及其在制備單克隆抗體中的應用無效
| 申請號： | 201310221532.3 | 申請日： | 2013-06-05 |
| 公開（公告）號： | CN103275961A | 公開（公告）日： | 2013-09-04 |
| 發明（設計）人： | 應國清;易喻;黃婷婷;梅建鳳;王鴻;陳建澍;張彥璐 | 申請（專利權）人： | 浙江工業大學 |
| 主分類號： | C12N11/08 | 分類號： | C12N11/08;C12P21/08;C12P21/06 |
| 代理公司： | 杭州天正專利事務所有限公司 33201 | 代理人： | 黃美娟;冷紅梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 溫敏性 固定 木瓜蛋白酶 及其 制備 單克隆抗體 中的 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種溫敏性的固定化木瓜蛋白酶，由如下方法制備得到：
（1）將DMF用分子篩干燥，溫敏性載體溶于干燥過的DMF中，溫敏性載體與DMF的比例是1g：1～10mL，得到載體溶液；所述溫敏載體為N-羥基琥珀酰亞胺酯封端的聚（N-異丙基丙烯酰胺）；
（2）將木瓜蛋白酶溶于pH7.5～10.0的硼酸鹽緩沖液中，調酶液濃度至1～10mg/mL，得到酶溶液；
（3）將載體溶液與酶溶液以1：4～6體積比混合，于4～55℃反應1～8h，反應液用pH7.5～10.0的硼酸鹽緩沖液稀釋；
（4）40℃空氣浴中，11000r/min離心20min，除去上清液，沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解，再于相同條件下離心；
（5）重復步驟（4）的操作2～3次，最后所得沉淀溶于新配的磷酸鹽緩沖液中，4℃保存，即得溫敏性的固定化木瓜蛋白酶溶液。
2.如權利要求1所述的溫敏性的固定化木瓜蛋白酶在制備單克隆抗體片段中的應用。
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