[發(fā)明專利]膽固醇含量分析樣品制備和膽固醇含量的自動分析方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310220437.1 | 申請日： | 2013-06-05 |
| 公開（公告）號： | CN103323307A | 公開（公告）日： | 2013-09-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 謝鋰紗;俞凌云;譚智;方智;胡江濤 | 申請（專利權(quán)）人： | 四川出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心 |
| 主分類號： | G01N1/28 | 分類號： | G01N1/28;G01N1/40;G01N35/08;G01N21/78 |
| 代理公司： | 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220 | 代理人： | 梁田 |
| 地址： | 610000 四川*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 膽固醇 含量 分析 樣品 制備 自動 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬膽固醇含量檢測術(shù)領(lǐng)域，特別涉及油脂中膽固醇的提取方法及膽固醇含量的自動分析方法。?
背景技術(shù)
膽固醇（Cholesterol）是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇作為一種營養(yǎng)素具有重要的生理功能，但是長期大量攝入，可能加大患動脈粥樣硬化、高血壓和冠心病等心血管疾病的風(fēng)險。?
目前，油脂的營養(yǎng)價值、品質(zhì)和質(zhì)量越來越受到消費者的重視。油脂中膽固醇的含量可作為鑒定油脂營養(yǎng)價值和品質(zhì)的一個重要指標(biāo)，檢測油脂中膽固醇的含量也是鑒別地溝油的重要手段之一。而目前，在檢測油脂中膽固醇含量的過程中，樣品前處理采用油脂皂化處理步驟繁瑣、樣品處理時間長、溶劑用量大，提取率低；皂化法提取精度僅達(dá)95%，有5%的膽固醇難以提取，即有5%的誤差；皂化法提取膽固醇需要3小時以上。?
目前檢測膽固醇含量方法中分光光度計法操作繁瑣、手動添加試劑、人為操作誤差大，且耗時。高效液相色譜和氣相色譜等設(shè)備費及運行成本高。現(xiàn)在測定膽固醇的分光光度法精度僅能達(dá)到2%，分光光度法的分析時間需要1h。?
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了精確度更高、時間更短的從油脂中提取膽固醇試樣的方法，以及精確度更高、時間更短的膽固醇含量自動分析方法。?
本發(fā)明所述油脂中膽固醇的提取方法，使用硅膠固相萃取小柱的型號為DIKMA?ProElut?SI進(jìn)行固相萃取法。?
油脂中膽固醇含量分析樣品的制備方法，包括如下步驟：?
（1）將油脂充分混勻后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，渦旋混勻后得到油脂溶液；
（2）將油脂溶液加入硅膠固相萃取小柱，從該小柱的底部孔棄去流出液；再用體積比為正己烷:乙醚=98:2的淋洗液5mL～10mL加入到硅膠固相萃取小柱中，從該小柱的底部孔棄去流出液；最后用體積比為正己烷:乙醚=92:8的淋洗液20mL～50mL加入到硅膠固相萃取小柱中，從該小柱的底部孔收集流出液備用；
（3）將上述（2）步驟的備用收集流改于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀干燥，轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在真空度300KPa～500KPa，溫度為40℃～50℃條件下將所述的收集流濃縮至10μL～50μL，將濃縮的收集流與5mL～10mL顯色液溶解制得膽固醇分析樣品；所述的顯色液是重量/體積比為鄰苯二胺（g）：冰乙酸（L）=0.03g/L～0.06g/L的溶液。
本發(fā)明所述的膽固醇含量分析方法是采用流動注射自動分析法，流動注射自動分析方法使用包括有樣品流路、推動液流路、顯色液流路、低壓泵P、進(jìn)樣閥V、進(jìn)樣環(huán)C0、冷卻反應(yīng)器L、反壓圈Y、三通混合器M、分析流路、光學(xué)流通池F、光學(xué)檢測器D和計算機(jī)處理系統(tǒng)PC的分析儀器。?
關(guān)于正己烷：乙醚=98:2（V:V=98:2）淋洗液的用量與淋洗效果：在已知膽固醇含量（300mg/kg）的油脂中提取膽固醇含量，稱取油脂質(zhì)量為1.0g的五個試樣，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，渦旋混勻后分別得到五個油脂溶液；淋洗液正己烷：乙醚=98:2（V:V=98:2）分別采用五個不同的體積為5mL、10mL、15mL、20mL、30mL，用五個淋洗液分別對五個油脂溶液淋洗；洗脫液中檢測出膽固醇的量變化很大，如下，說明用5mL～10mL不同體積的淋洗液對試樣淋洗可分離出膽固醇，即保留膽固醇在硅膠固相萃取小柱中，等待用專門洗脫膽固醇的淋洗液洗脫。?
用5mL（V:V=98:2）淋洗液的未檢出膽固醇；?
用10mL（V:V=98:2）淋洗液的未檢出膽固醇；
用15mL（V:V=98:2）淋洗液的檢出膽固醇含量為2.5mg/L；
用20mL（V:V=98:2）淋洗液的檢出膽固醇含量為4.0mg/L；
用30mL（V:V=98:2）淋洗液的檢出膽固醇含量為6.0mg/。
但用20mL～50mL正己烷:乙醚=92:8（V:V=92:8）的淋洗液加入到已經(jīng)用5mL～10mL正己烷:乙醚=98:2（V:V=98:2）淋洗過的硅膠固相萃取小柱中洗脫膽固醇，洗脫即提取膽固醇的量高達(dá)98.38%，則提取膽固醇試樣的精度高達(dá)1.62%。?
油脂中膽固醇含量的測定方法，包括如下步驟：?
（1）溶解：將油脂充分混勻后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，渦旋混勻后得到油脂溶液；
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